基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜快速鑒別耐藥細(xì)菌的研究.pdf

1、目的：評(píng)價(jià)基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜（Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-flight Mass Spectrometry, MALDI-TOF MS）VITEK MS對(duì)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌和耐萬(wàn)古霉素屎腸球菌的快速鑒別能力。
　　方法：收集279株金黃色葡萄球菌臨床分離株，應(yīng)用VITEK MS質(zhì)譜儀鑒定菌種，苯唑西林和頭孢西丁紙片擴(kuò)散法初篩耐藥菌株，聚

2、合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）檢測(cè)mecA基因。采用VITEK MS建立甲氧西林耐藥金黃色葡萄球菌(MRSA)和甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌（MSSA）的數(shù)據(jù)庫(kù)(SuperSpectra)，獲得兩組用于區(qū)分的特征峰，并應(yīng)用臨床菌株對(duì)新建立的SuperSpectra進(jìn)行驗(yàn)證。
　　同樣收集196株屎腸球菌臨床菌株，VITEK MS進(jìn)行菌種鑒定，萬(wàn)古霉素和替考拉寧紙片擴(kuò)散法初篩耐藥菌株，PCR檢測(cè)萬(wàn)古霉素耐藥基因(包括vanA、vanB和van

3、M)。采用VITEK MS建立萬(wàn)古霉素耐藥屎腸球菌（VRE）和萬(wàn)古霉素敏感屎腸球菌（VSE）的SuperSpectra，獲得兩組用于區(qū)分的特征峰，并應(yīng)用臨床菌株對(duì)新建立的SuperSpectra進(jìn)行驗(yàn)證。
　　結(jié)果：收集的279株金黃色葡萄球菌臨床菌株中275株經(jīng)VITEK MS確認(rèn)為金黃色葡萄球菌，其中143株經(jīng)紙片法藥物敏感性和PCR擴(kuò)增試驗(yàn)證實(shí)為甲氧西林耐藥且攜帶mecA基因，132株為甲氧西林敏感菌株且不攜帶mecA基因，

4、紙片擴(kuò)散法和mecA基因檢測(cè)符合率為100％。隨機(jī)采集66株MRSA臨床菌株和1株標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC43300的質(zhì)譜指紋圖譜建立MRSA SuperSpectra，隨機(jī)采集64株MSSA臨床菌株和2株標(biāo)準(zhǔn)菌株（ATCC25923、ATCC29213）的質(zhì)譜指紋圖譜建立MSSA SuperSpectra，比對(duì)MRSA和MSSA SuperSpectra得到兩個(gè)質(zhì)荷比為2305.6Da和3007.3Da的MRSA特征峰，而質(zhì)荷比為6816.7

5、Da的峰為MSSA特有的響應(yīng)值較高的峰，驗(yàn)證結(jié)果顯示該方法對(duì)MRSA鑒定準(zhǔn)確率達(dá)84.21%，對(duì)MSSA的鑒定準(zhǔn)確率達(dá)90.91%，對(duì)于金黃色葡萄球菌是否耐藥的鑒定總的準(zhǔn)確率為87.32%。
　　收集的196株屎腸球菌臨床菌株經(jīng)質(zhì)譜鑒定均為屎腸球菌，其中105株經(jīng)紙片法藥物敏感性和PCR擴(kuò)增試驗(yàn)證實(shí)為VRE（66株攜帶vanA基因，39株攜帶vanM基因），91株為敏感菌株，紙片擴(kuò)散法和PCR結(jié)果符合率為100%。隨機(jī)采集62株臨

6、床耐藥株和58株臨床敏感株的質(zhì)譜指紋圖譜分別建立 VRE SuperSpectra和 VSE SuperSpectra，比對(duì)兩個(gè)SuperSpectra發(fā)現(xiàn)，6601.4 Da處的峰為VRE特征峰，而3723.9 Da和3883.1 Da處的峰為VSE的兩個(gè)特征峰，臨床菌株驗(yàn)證表明該方法對(duì)VRE的鑒定準(zhǔn)確率為88.37%，VSE準(zhǔn)確率為75.76%，對(duì)于屎腸球菌是否耐藥的總鑒定準(zhǔn)確率為82.89%。
　　結(jié)論：VITEK MS可以