雙向凝膠電泳聯(lián)合基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜分析在膝關節(jié)骨性關節(jié)炎滑液蛋白質(zhì)組學研究中的應用.pdf

1、目的:
　　聯(lián)合運用雙向凝膠電泳(2-DE)和基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)技術,研究膝關節(jié)骨性關節(jié)炎(KOA)與非KOA關節(jié)滑液蛋白質(zhì)組表達圖譜的差異,進一步闡述KOA的發(fā)病機制,尋找并初步明確KOA關節(jié)滑液中的特異性生物學標志,為該病的早期診治、療效監(jiān)測和預后評估提供可靠的、準確靈敏的實驗室參考指標。
　　方法:
　　收集2011年8月-2012年4月在解放軍總醫(yī)院行關節(jié)鏡診治的12例

2、KOA患者與12例非KOA膝關節(jié)疾病患者(半月板損傷10例,盤狀半月板2例,均無明顯關節(jié)軟骨損傷)關節(jié)滑液標本。KOA患者疾病嚴重程度分級采用Kellgren-Lawrence(KL)放射學分級標準。2-DE的第一向電泳采用固相PH梯度電泳,第二向采用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分析關節(jié)滑液蛋白質(zhì)組成分。電泳后經(jīng)質(zhì)譜兼容銀染,ImageMaster2DPlatinum軟件分析,將有統(tǒng)計學差異的蛋白質(zhì)點膠內(nèi)胰蛋白酶解,經(jīng)MALDI-TOF-

3、MS鑒定分析,定性后采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)定量分析部分具有潛在臨床意義的蛋白。
　　結(jié)果:
　　KOA患者與非KOA膝關節(jié)疾病患者關節(jié)滑液相比較,經(jīng)2-DE-質(zhì)譜技術分析,共鑒定出31個具有統(tǒng)計學差異的蛋白(p<0.05),差異點分布在pI3.0-10.0、分子量14.0kDa-97.0kDa之間。其中25個(80.6％)被認為具有潛在的臨床意義。在這25個蛋白中,有12個(48%)結(jié)構(gòu)蛋白,5個(20%)代謝酶

4、類,2個(8%)轉(zhuǎn)運蛋白,2個(8%)免疫球蛋白,4個(16%)其它類型蛋白。其中20個(80%)在KOA滑液中表達上調(diào),5個(20%)表達下調(diào)。組織相容性白細胞抗原-DR(HLA-DR)、結(jié)合珠蛋白在KOA中表達上調(diào),且與病情嚴重程度高度相關。
　　結(jié)論:
　　1.根據(jù)蛋白質(zhì)不同的分子量和等電點,通過2-DE可分離關節(jié)滑液中蛋白質(zhì)成分,并可利用分析軟件找到KOA關節(jié)滑液中的差異蛋白質(zhì)。
　　2.KOA與非KOA相比,