甲型副傷寒沙門菌特異性蛋白篩選.pdf

1、目的在引起傷寒、副傷寒的病原中，甲型副傷寒沙門菌所占的比例逐漸升高。我國每年均有不同程度的地方性甲型副傷寒流行及暴發(fā)。針對甲型副傷寒沙門菌引起的感染，通常采用全血細菌分離培養(yǎng)，耗時較長，且分離率較低，難以滿足臨床或突發(fā)公共衛(wèi)生事件快速診斷及鑒別診斷的需要。加之目前已有血清學診斷方法的特異性較差、敏感性較低，使研究發(fā)展快速檢測甲型副傷寒沙門菌感染的技術及方法成為必需。另外，由于現(xiàn)在還沒有針對甲型副傷寒沙門菌的疫苗，所以迫切需要甲型副傷寒沙

2、門菌快速檢測的方法和能刺激機體免疫系統(tǒng)產生抗體的抗原蛋白。本研究旨在篩選甲型副傷寒沙門菌外膜蛋白中具有免疫原性的蛋白抗原，用于甲型副傷寒沙門菌的早期診斷；同時篩選出具有良好免疫保護性的蛋白，作為候選疫苗的靶標。方法提取8株臨床分離的甲型副傷寒沙門菌的外膜蛋白，利用雙向電泳進行分離，轉移至PVDF膜上，與病人的血清進行蛋白印跡雜交篩選、鑒定出有強免疫性的蛋白質。并利用pET24b、pET30a和pET51b三種載體，將篩選得到的蛋白在原核

3、系統(tǒng)中進行表達、純化后，用病人血清進行蛋白印跡雜交，驗證蛋白的免疫性。結果篩選到了20個具有免疫性的蛋白點，經MALDI-TOF-MS鑒定，代表了7種蛋白，分別為早期蛋白OmpX、TolC、SdhB和MetQ，恢復期蛋白OmpA、AcrA和LldD蛋白質。7個蛋白均能在BL21(DE3)中大量表達。用47份甲型副傷寒病人血清與7個純化后的抗原進行雜交，其中47份(100％)能與LldD、AcrA、SdhB雜交，46份(97.87)能與O