我國部分地區(qū)傷寒和甲型副傷寒沙門菌分離株的分子流行病學(xué)分析_1729.pdf

1、中國疾病預(yù)防控制中心碩士學(xué)位論文我國部分地區(qū)傷寒和甲型副傷寒沙門菌分離株的分子流行病學(xué)分析姓名：李偉申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：病原生物學(xué)指導(dǎo)教師：祁國明20030701其中一種。PPX4帶型從1999年出現(xiàn)后，近三年該帶型菌株數(shù)量有增多的趨勢。PPX2，PPX3兩種帶型可能只是在局部地區(qū)短期存在。只有4種不同的帶型，說明我國甲副的流行起源于少數(shù)幾個克隆系的菌株，并在各地廣泛傳播而引起。勛eI和BlnI兩種酶酶切電泳后各自產(chǎn)生3種不同的帶型

2、，反映染色體上不同的遺傳信息及其變化，可以在進(jìn)行暴發(fā)分析及追蹤傳染源的研究中，作為XbaI酶切的補充或與XbaI聯(lián)合應(yīng)用。本研究對不同年代和地區(qū)的7株傷寒菌株和17株甲副菌株，進(jìn)行了管家基因mdh和侵襲相關(guān)基因spaO的測序比較。共得到8種不同的spaO基因序列和3種mdh基因序列。7株傷寒沙門氏菌的m砌基因完全相同，為mdhl型。而18株甲副菌株中，除浙江的菌株具有不同的mdh3型基因外，其余17株菌，包括對照株均具有相同的mdh2型

3、基因，包含的菌株占菌株總數(shù)的941％。mdh基因共有13個多態(tài)性位點，堿基變異率為12％。spaO基因共有12個多態(tài)性位點，堿基變異率為13％。spa01是spaO基因的主要類型，包含的菌株占總數(shù)的765％，在江蘇發(fā)現(xiàn)的spa04和浙江的spa02、spa03等位基因說明這兩個地區(qū)存在著不同克隆系的甲副菌株。對25株甲副菌株進(jìn)行了ERICPCR擴增，產(chǎn)生4種不同的帶型，有18株菌屬于EP4a型，占總數(shù)的72O％。對35株傷寒沙門氏菌的E

4、RICPCR擴增發(fā)現(xiàn)，傷寒和甲副的ERICPCR帶型有明顯的不同，可分為6種帶型，以ET3和ET6兩種帶型為主，占總數(shù)的714％。ERICPCR操作相對簡便，但實驗重復(fù)性差，限制了該方法用于分析大量菌株以及不同實驗室之間數(shù)據(jù)的比較。選擇2l株進(jìn)行了PFGE、ERICPCR、mdh、spaO基因測序的傷寒和甲副菌株，綜和應(yīng)用幾種方法(EP—S—M)進(jìn)行聚類分析。兩種血清型的菌株很明顯地聚為兩大類。整個漿類的相似性系數(shù)在822ioo％Z閫。

5、對幾種方法分型一致性的比較發(fā)現(xiàn)PFGE和EP—S—M綜合分析的方法一致性最高，達(dá)到了894％。ERICPCR與其他幾種方法的一致性最差。我們用PFGE、重要基因測序以及ERICPCR的方法，對部分分離于我國傷寒副傷寒高發(fā)省區(qū)的分離菌株進(jìn)行分子流行病學(xué)分析，初步獲得了我國重點傷寒副傷寒流行省份菌株的一些病原分子流行病學(xué)特征。為選擇合適的分子流行病學(xué)監(jiān)鍘方法提供了參考依據(jù)，通過以上研究，我t1]iA為不同方法相結(jié)合可從多個方面代表性地反映菌