我國部分地區(qū)HIV-1流行毒株耐藥性的分子流行病學(xué)研究.pdf

1、目的：了解抗病毒治療前后我國部分地區(qū)HIV-1耐藥性毒株發(fā)生和流行的情況，評價(jià)河南省艾滋病病人抗病毒治療的效果；初步探討HIV-1pol基因準(zhǔn)種變異度和系統(tǒng)發(fā)生規(guī)律。 方法：以河南省、河北省和貴州省部分未經(jīng)抗病毒治療的艾滋病病人和河南省部分接受抗病毒治療3個(gè)月和6個(gè)月的艾滋病病人為研究對象，首先進(jìn)行問卷調(diào)查，了解病人的一般情況、臨床表現(xiàn)、抗病毒治療方案和服藥依從性等情況。采集病人抗凝全血，測定病毒載量和CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)。應(yīng)

2、用RT-PGR技術(shù)從血漿中擴(kuò)增HIV-1pol基因片段，登陸web站點(diǎn)http：//hivdb.stanford.edu和http：//hiv-web.lanl.gov進(jìn)行基因型耐藥性分析；利用BioEdit、DNAClub、DNASTAR和ClustalX軟件以及分子克隆技術(shù)進(jìn)行HIV-1pol基因準(zhǔn)種變異度和系統(tǒng)發(fā)生情況的研究。所有結(jié)果經(jīng)SPSS1.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果：共調(diào)查100例未經(jīng)抗病毒治療的病人并采集抗凝

3、全血標(biāo)本(河南省45例、河北省10例和貴州省45例)，完成pol基因序列擴(kuò)增與基因型耐藥性檢測61例(河南省36例、河北省5例和貴州省20例)；接受抗病毒治療的病人均來自河南省，其治療方案是兩種核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑和一種非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(AZT+DDI+NVP)，分別于抗病毒治療3個(gè)月和6個(gè)月時(shí)，調(diào)查118和166個(gè)病人并采集抗凝全血標(biāo)本，完成pol基因序列擴(kuò)增與基因型耐藥性檢測51例和83例。 接受抗病毒治療3個(gè)月和6個(gè)

4、月時(shí)的總體耐藥率分別為43.1％(22/51)和48.2％(40/83)，兩者之間無顯著差別(P＞0.05)，但均顯著高于未接受抗病毒治療時(shí)的13.1％(8/61)(P＜0.01)。其中蛋白酶和核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑的耐藥率，在抗病毒治療前后差別不顯著(P＞0.05)；而非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑的耐藥率，在接受抗病毒治療后，比未經(jīng)抗病毒治療時(shí)顯著升高(P＜0.01)。未經(jīng)抗病毒治療、抗病毒治療3個(gè)月和6個(gè)月時(shí)，對兩類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑的多重耐藥

5、率分別為1.6％、9.8％和9.6％(1/61、5/51和8/83)，其多重耐藥譜主要為AZT+DDI+DLV+EFV+NVP；交叉耐藥率分別為3.3％、29.4％和36.1％(2/61、15/51和30/83)，主要發(fā)生在非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，造成對NVP耐藥的病人均對DLV耐藥，而且大約90％對NVP耐藥的病人還對EFV耐藥。接受抗病毒治療后，對治療藥物AZT、DDI或NVP耐藥的病人數(shù)占全部耐藥病人數(shù)的90％以上，顯著高于未經(jīng)抗

6、病毒治療時(shí)的37.5％(P＜0.01)。接受抗病毒治療3個(gè)月時(shí)，高度耐藥率顯著高于未經(jīng)抗病毒治療和接受抗病毒治療6個(gè)月時(shí)的水平(P＜0.01)，其高度耐藥譜主要為DLV、EFV和NVP。 堅(jiān)持服藥的病人中有72.8％病情明顯好轉(zhuǎn)，而未堅(jiān)持服藥的病人中僅有25％病情明顯好轉(zhuǎn)，服藥依從性對病情趨勢變化具有顯著性影響(P＜0.01)。接受抗病毒治療3個(gè)月和6個(gè)月時(shí)，共檢測59例病人的病毒載量，均值分別為5.19log和5.27log(

7、拷貝/ml)，兩者之間無顯著差異(P＞0.05)。接受抗病毒治療3個(gè)月和6個(gè)月時(shí)，分別測定97例病人的CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)，其均值分別為454.3+45.34和372.4+44.15(個(gè)/mm3)，抗病毒治療6個(gè)月時(shí)的CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)反而顯著低于抗病毒治療3個(gè)月時(shí)的水平(P＜0.01)。接受抗病毒治療3個(gè)月和6個(gè)月時(shí)，攜帶耐藥性毒株的病人，其CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)均顯著低于未攜帶耐藥性毒株的病人(P＜0.01)；分別有68％和7

8、0％攜帶耐藥性毒株的病人，其CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)小于400(個(gè)/mm3)。 pol基因系統(tǒng)發(fā)生分析顯示，全部標(biāo)本除貴州省2例為CRFBC亞型外(GenBankaccessionnos.AF286230.)，其余均為B亞型。河南省艾滋病病人所感染的HIV-1毒株具有高度的系統(tǒng)發(fā)生同源性，與B.US.83.RFACCM17451毒株的親緣關(guān)系最為接近。接受抗病毒治療3個(gè)月和6個(gè)月時(shí)，HIV-1pol基因PR區(qū)的平均基因離散率分別為

9、6.3％和9.2％，相差不顯著(P＞0.05)，而RT區(qū)的平均基因離散率分別為33.6％和40.3％，相差顯著(P＜0.01)，而且抗病毒治療前后，PR區(qū)的平均基因離散率均顯著小于RT區(qū)的平均基因離散率(P＜0.001)。未經(jīng)抗病毒治療時(shí)血漿中pol基因準(zhǔn)種的變異度大于抗病毒治療6個(gè)月時(shí)的水平；未經(jīng)抗病毒治療時(shí)，前病毒中的pol基因準(zhǔn)種變異度小于血漿中的水平，P值均小于0.01。 結(jié)論：我國部分地區(qū)未經(jīng)抗病毒治療的HIV-1耐藥

10、性毒株流行率為13.1％。在接受抗病毒治療6個(gè)月時(shí)，河南省部分地區(qū)的HIV-1耐藥性毒株流行率已經(jīng)達(dá)到48.2％，對治療藥物耐藥的病人數(shù)占全部耐藥病人數(shù)的90％以上；治療過程中病毒載量的改善不顯著，CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)還略有下降且和耐藥性的發(fā)生具有一致性；堅(jiān)持服藥的病人臨床癥狀好轉(zhuǎn)率顯著高于未堅(jiān)持服藥的病人。河南省HIV-1毒株的pol區(qū)序列具有高度的系統(tǒng)發(fā)生同源性，其自身的變異受抗病毒治療藥物的影響較大。提示警惕耐藥性HIV毒株的傳