EBV感染與甲狀腺乳頭狀癌細胞中BRAF表達的相關(guān)研究.pdf

1、目的:甲狀腺癌是發(fā)病率最高的內(nèi)分泌系統(tǒng)頭頸部惡性腫瘤，大約占內(nèi)分泌系統(tǒng)惡性腫瘤的95％，占全身腫瘤的1.3％，在癌癥死亡病例中約占0.5％，對人類的健康造成嚴重的威脅。甲狀腺癌的發(fā)病率隨著年齡、性別和地域的不同而有所差別。根據(jù)國際癌癥學會資料統(tǒng)計，世界不同地區(qū)年齡標準的10萬人發(fā)病率，以夏威夷和冰島地區(qū)的發(fā)病率最高，男性2.9/10萬，女性8/10萬。波蘭發(fā)病率最低，女性1.4/10萬，男性0.4/10萬。我國屬于甲狀腺癌發(fā)病率較低的地

2、區(qū)，2004年上海市的甲狀腺癌男性的發(fā)病率為3.71/10萬，女性的發(fā)病率為10.49/10萬。甲狀腺癌是20多年以來發(fā)病率增長最快的惡性實體腫瘤，每年平均增長約6.2％。甲狀腺癌的病理類型可以分為甲狀腺乳頭狀癌（papillarythyroidcarcinoma，PTC），甲狀腺濾泡狀癌(follicularthyroidcarcinoma，F(xiàn)TC)，甲狀腺未分化癌(anaplasticthyroidcarcinoma，ATC)和甲狀

3、腺髓樣癌(medullarythyroidcarcinoma，MTC)。其中PTC最多，占所有甲狀腺癌的80％以上。我國的流行病學資料也說明甲狀腺癌的發(fā)病率呈上升趨勢，尤其是PTC。究其原因，可能與隨著人們對PTC的認識不斷深入，診斷技術(shù)日益提高，患者就診意識的增強以及人們生活環(huán)境質(zhì)量的下降等有關(guān)。但是，PTC的病因及病機并不明確。地域，年齡，性別，環(huán)境污染，電離輻射，精神壓力，遺傳因素，碘攝入量的改變，促甲狀腺激素，性激素，癌基因的激

4、活，抑癌基因的失活以及某些甲狀腺良性疾病等都被認為與PTC發(fā)生相關(guān)。繼續(xù)深入研究這些因素在甲狀腺乳頭狀癌發(fā)生發(fā)展中的作用及機制，并進一步尋找新的因素十分必要。
　　 近年來，隨著腫瘤發(fā)病率的日益增加和科研手段的發(fā)展，人們發(fā)現(xiàn)病毒和腫瘤有密切關(guān)系。1964年Epstein和Barr在非洲兒童惡性淋巴瘤中首先培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)EB病毒(EBV)，是第一個被證實與多種惡性腫瘤的發(fā)生有關(guān)的具有致瘤潛能的γ皰疹類病毒，B細胞是其主要的宿主細胞，對人

5、的B淋巴細胞，上皮細胞有親嗜力，現(xiàn)已在多種癌組織中檢測出EBV的基因產(chǎn)物。但EBV感染與甲狀腺癌發(fā)生的相關(guān)性及機制的研究報道甚少。EB病毒的感染后人體后，大多數(shù)人處于潛伏感染的狀態(tài)，此期間可表達10余種蛋白質(zhì)，其中EBV潛伏膜蛋白-1（LMP-1），表達作用與活化的RAS（一種G蛋白）分子相似。這提示兩者可能具有相同的信號轉(zhuǎn)導通路:RAF（有絲分裂原活化蛋白）-MEK（絲裂原激活蛋白激酶的激酶）-ERK（細胞外信號調(diào)節(jié)激酶）-MAPK（

6、絲裂原激活蛋白激酶）信號通路。有研究表明:80％的甲狀腺乳頭狀癌是通過上述通路的激活進而導致腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。也有研究表明LMP1可能繞過Ras及而直接從Raf開始啟動MEK-ERK-MAPK信號途徑。鼠類肉瘤濾過性毒菌致癌同源體B1(BRAF)，在甲狀腺乳頭狀癌中被認為是RAF-MEK-ERK-MAPK信號通路的最強激活劑，其表達增加，提示該信號通路活躍，使甲狀腺濾泡上皮細胞過度增殖，異常分化，最終導致腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。
　　

7、 本研究旨在檢測PTC和甲狀腺腺瘤組織中EBV的感染及BRAF蛋白的表達情況。研究EBV感染與PTC組織中BRAF蛋白的表達是否相關(guān)，進一步探討PTC的發(fā)生是否與EBV感染有關(guān)，從而深入對PTC病因的認識。
　　 方法:收集河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院病理科2011年3月至2012年9月手術(shù)切除的甲狀腺腫瘤石蠟標本139例。其中PTC98例，甲狀腺腺瘤41例，對每一例標本均進行常規(guī)HE染色，經(jīng)兩位以上病理科醫(yī)師確認。取相應(yīng)腫瘤旁組織作為

8、對照。應(yīng)用免疫組織化學染色法檢測PTC組織和相應(yīng)腫瘤旁組織中的BRAF蛋白的表達情況和原位分子雜交法檢測PTC組織和相應(yīng)腫瘤旁組織中的EBER-1的表達情況，同法檢測甲狀腺腺瘤組織。用SPSS16.0軟件，采用非配對x2檢驗，對研究結(jié)果進行統(tǒng)計學分析，檢驗標準為P＜0.05有統(tǒng)計學意義。
　　 結(jié)果:
　　 1、BRAF蛋白在PTC和甲狀腺腺瘤組織中的表達狀況
　　 BRAF蛋白的陽性信號位于PTC和甲狀腺腺瘤細

9、胞的胞漿內(nèi)，結(jié)果詳見附圖。各自的表達陽性率詳見附表。BRAF蛋白在PTC中表達的陽性率為62.2％(61/98)，甲狀腺腺瘤中的陽性率為17.1％(7/41)。在PTC組中，男性BRAF蛋白的表達陽性率為55.2％(16/29)，女性為65.2％(45/69)。良惡性腫瘤旁組織未見有陽性表達。PTC和甲狀腺腺瘤之間經(jīng)過非配對x2檢驗差異有統(tǒng)計學意義(Pearsonx2=23.604，P=0.000＜0.05)。BRAF蛋白在PTC組織中

10、的表達的性別差異無統(tǒng)計學意義(Pearsonx2=0.887，P=0.349＞0.05)。
　　 2、EBER-1在甲狀腺腫瘤組織中的表達情況
　　 EBER-1的陽性信號呈棕褐色，顆粒狀，染色明顯高于背景色，定位于PTC和甲狀腺腺瘤細胞的細胞核內(nèi)，陰性細胞不著色，結(jié)果詳見附圖。所有陰性對照及空白對照結(jié)果都明確無顯色，而且沒有背景染色干擾，各自的表達陽性率詳見附表。EBER-1在PTC中表達的陽性率為64.3％(63/9

11、8)。在PTC患者中，男性EBER-1表達陽性率為58.6％(17/29)，女性的陽性表達率為66.7％(46/69)。41例甲狀腺腺瘤組織中有16例呈EBER-1陽性表達，陽性表達率為39.0％。PTC和甲狀腺腺瘤的腫瘤旁組織中均未見有陽性表達。PTC與甲狀腺腺瘤之間，經(jīng)非配對x2檢驗，結(jié)果顯示差異有統(tǒng)計學意義(Pearsonx2=7.519，P=0.006＜0.05)。EBER-1在PTC組織中的表達的性別差異沒有統(tǒng)計學意義(Pea

12、rsonx2=0.576，P=0.448＞0.05)。
　　 3、EBER-1陽性和陰性的PTC組織中BRAF表達
　　 EBER-1呈陽性表達，即EB病毒感染的63例PTC組織中有48例BRAF蛋白高表達，陽性率為76.2％(48/63)。EBER-1呈陰性表達，即未感染EB病毒的35例PTC組織中BRAF蛋白的陽性表達率為37.1％(13/35)，經(jīng)非配對四格表資料x2檢驗法檢驗:EB病毒感染和非感染的PTC病例中B

13、RAF蛋白的陽性率不同，差異有統(tǒng)計學意義(Pearsonx2=14.598,P=0.000＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1、BRAF蛋白在甲狀腺乳頭狀癌和甲狀腺腺瘤組織中表達的陽性率不同，甲狀腺乳頭狀癌組織中的陽性率較高，提示BRAF的高表達與甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)生可能比甲狀腺腺瘤的發(fā)生更密切。
　　 2、甲狀腺乳頭狀癌與甲狀腺腺瘤組織中EB病毒感染的陽性率不同，甲狀腺癌乳頭狀癌組織中陽性率較高，提示EB病毒