糖尿病患者血漿nesfatin-1水平、人胃NUCB2測(cè)定及MSG損毀弓狀核對(duì)小鼠胃粘膜ghrelin、nesfatin-1的影響.pdf

1、目的：觀察糖尿病患者血漿nesfatin-1的水平及營(yíng)養(yǎng)素對(duì)血漿nesfatin-1水平波動(dòng)的影響；鑒定人類(lèi)胃粘膜是否含有NUCB2/nesfatin。
　　 檢測(cè)小鼠弓狀核和其它血腦屏障不完善的區(qū)域（如最后區(qū)）是否被MSG損毀，食物剝奪后動(dòng)員身體脂肪的貯存的能力是否受到干擾；弓狀核損毀后是否影響到胃及血漿的ghrelin、nesfatin-1水平。
　　 方法：20例正常人、10例Ⅰ-型糖尿病和47例Ⅱ-型糖尿病患者，

2、空腹采血3ml;16例健康志愿者，禁食12h后，男女各半分為兩組，先空腹采血3ml，一組口服300ml生理鹽水，另一組口服含759葡萄糖的300ml液體后30、60、90、150、210min采血。ELISA法檢測(cè)血漿nesfatin-1和血糖水平的變化。十例胃癌手術(shù)后切除的正常胃組織，通過(guò)RT-PCR、Westemblot、免疫熒光雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)鑒定人類(lèi)胃粘膜是否含有NUCB2/nesfatin。
　　 新生健康昆明小白鼠，雌雄不限

3、。隨機(jī)分為正常對(duì)照組和MSG處理組，每組16只。MSG處理組小鼠出生后隔日（第1，3，5，7和9天，共5次）于頸部皮下注射MSG（4mg/g體重），而正常對(duì)照組只給予同體積的生理鹽水。第四周斷乳后，放入攝食分析儀測(cè)攝食；第十二周后，每組在正常飲食、禁食48h、再進(jìn)食后，分別內(nèi)眥取血，測(cè)血漿ghrelin水平；此后每組再分為正常飲食組、禁食48h組，分別斷頭取腦，冰凍切片觀察弓狀核損毀情況，取胃組織行RT-PCR、Westernblot實(shí)

4、驗(yàn)，以檢測(cè)ghrelin、nesfatin-1mRNA及蛋白質(zhì)水平；取各部位脂肪稱重。
　　 結(jié)果：血漿nesfatin-1水平無(wú)性別變化：Ⅰ型糖尿患者組比正常對(duì)照組血漿nesfatin-1水平稍升高，但差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Ⅱ-型糖尿病患者組血漿nesfatin-1水平明顯低于Ⅰ型糖尿患者組和正常對(duì)照組?？诜咸烟?0min后，血漿nesfatin-1水平稍高于基礎(chǔ)水平（從基礎(chǔ)水平0.99±0.23ng/ml升高1.08±0.24

5、ng/ml），但觀察到各個(gè)時(shí)間點(diǎn)血漿nesfatin-1水平無(wú)明顯差別。
　　 人類(lèi)胃粘膜含有NUCB2/nesfatin基因和蛋白質(zhì)，免疫熒光雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)顯示nesfatin-1陽(yáng)性細(xì)胞，nesfatin-1與ghrelin共表達(dá)率為67.8％;ghrelin陽(yáng)性的細(xì)胞，ghrelin與nesfatin-1共表達(dá)率為88.6％。
　　 與生理鹽水組小鼠相比，MSG組小鼠弓狀核甲酚紫染色神經(jīng)元明顯減少（P＜0.01），TH、

6、NPY免疫陽(yáng)性神經(jīng)元也明顯減少(P＜0.01)，最后區(qū)TH免疫陽(yáng)性神經(jīng)元明顯減少(P＜0.01)。
　　 從第四周斷乳后，MSG組小鼠與生理鹽水組小鼠比較，每周的攝食量沒(méi)有明顯改變。第十二周后，MSG處理的小鼠比生理鹽水處理的小鼠體重明顯增加(P＜0.01)；MSG組小鼠和生理鹽水組小鼠食物剝奪后，與各自自由飲食的小鼠相比體重也明顯降低（P＜0.05）。與生理鹽水處理的小鼠相比，MSG處理的小鼠在所分析的部位（腹膜后、雙側(cè)腹股溝

7、、性腺）白色脂肪組織量及肩胛間棕色脂肪組織都明顯增加(P＜0.01)，白色脂肪組織的總量也明顯增加（P＜0.01）。與生理鹽水處理的小鼠相比，新生小鼠MSG處理后不能阻斷或減少食物剝奪后引起的白色脂肪組織脂質(zhì)動(dòng)員的減少。因此，MSG組小鼠和生理鹽水組小鼠食物剝奪后，與各自自由飲食的小鼠相比，腹膜后和雙側(cè)腹股溝的白色脂肪量明顯降低(P＜0.05)，而性腺白色脂肪量卻沒(méi)有明顯降低。
　　 MSG處理的小鼠，在禁食48h后血漿ghre

8、lin水平明顯高于禁食前，進(jìn)食后血漿ghrelin水平又明顯降低；生理鹽水組小鼠在禁食48h后血漿ghrelin水平明顯高于禁食前，進(jìn)食后血漿ghrelin水平又明顯降低(P＜0.01)，MSG組小鼠與生理鹽水組小鼠比較，無(wú)論是在禁食前、禁食48h，還是進(jìn)食后，血漿ghrelin水平無(wú)明顯改變。
　　 MSG處理的小鼠，在禁食48h后胃粘膜組織ghrelinmRNA表達(dá)明顯高于禁食前（P＜0.01）：生理鹽水組小鼠在禁食48h后

9、胃粘膜組織ghrelinmRNA表達(dá)也明顯高于禁食前（P＜0.05）。MSG組小鼠與生理鹽水組小鼠比較，無(wú)論是在禁食前，還是在禁食48h，胃粘膜組織ghrelinmRNA表達(dá)水平無(wú)明顯改變。
　　 MSG處理的小鼠，在禁食48h后胃粘膜組織nesfatin-1前體蛋白NUCB2mRNA表達(dá)明顯低于禁食前(P＜0.05)；生理鹽水組小鼠在禁食48h后胃粘膜組織nesfatin-1前體蛋白NUCB2mRNA表達(dá)明顯低于禁食前(P＜0

10、.01)。MSG組小鼠與生理鹽水組小鼠比較，無(wú)論是在禁食前，還是在禁食48h，胃粘膜組織nesfatin-1前體蛋白NUCB2mRNA表達(dá)表達(dá)水平無(wú)明顯改變。
　　 MSG處理的小鼠，在禁食48h后胃粘膜組織proghrelin蛋白表達(dá)明顯高于禁食前（P＜0.01）；生理鹽水組小鼠在禁食48h后胃粘膜組織proghrelin蛋白表達(dá)也明顯高于禁食前(P＜0.01)。MSG組小鼠與生理鹽水組小鼠比較，無(wú)論是在禁食前，還是在禁食48

11、h，胃粘膜組織proghrelin蛋白表達(dá)水平無(wú)明顯改變。
　　 MSG處理的小鼠，在禁食48h后胃粘膜組織nesfatin-1前體蛋白NUCB2蛋白表達(dá)明顯低于禁食前(P＜0.01);生理鹽水組小鼠在禁食48h后胃粘膜組織nesfatin-1前體蛋白NUCB2蛋白表達(dá)明顯低于禁食前(P＜0.01)。MSG組小鼠與生理鹽水組小鼠比較，無(wú)論是在禁食前，還是在禁食48h，胃粘膜組織nesfatin-1前體蛋白NUCB2蛋白表達(dá)表達(dá)水

12、平無(wú)明顯改變。
　　 結(jié)論：Ⅱ-型糖尿病患者組血漿nesfatin-1水平明顯低于Ⅰ型糖尿患者組和正常對(duì)照組，這種結(jié)果的意義還不清楚，但血漿nesfatin-1水平降低，可能與糖尿病的多食和胰島素抵抗有關(guān)；另外，不論生理鹽水，還是葡萄糖攝入都不能影響血漿nesfatin-1水平，說(shuō)明目前條件下胃化學(xué)狀態(tài)不足以引起nesfatin-1的反應(yīng)，人胃粘膜存在NUCB2/nesfatin基因和蛋白質(zhì)，大多數(shù)表達(dá)ghrelin的P/D1樣

13、細(xì)胞也表達(dá)NUCB2/nesfatin-1。
　　 MSG能夠損毀弓狀核、最后區(qū)。這些部位的正常功能有可能被代償，食物剝奪后白色脂肪組織的動(dòng)員也就表現(xiàn)為正常。完整的弓狀核、最后區(qū)對(duì)于食物剝奪引起的白色脂肪組織的脂質(zhì)動(dòng)員并不是必需的，但可能在其他能量要求的條件下（如鍛煉或寒冷暴露）的脂質(zhì)動(dòng)員的發(fā)動(dòng)上起作用。
　　 MSG處理的小鼠，盡管損毀了弓狀核NPY/AgRP神經(jīng)元，但禁食48h后血漿ghrelin仍然明顯升高，因此弓

14、狀核NPY/AgRP神經(jīng)元損毀并沒(méi)有影響ghrelin的餐前分泌峰，說(shuō)明弓狀核NPY/AgRP神經(jīng)元對(duì)于ghrelin餐前分泌峰并不是必須的，關(guān)于ghrelin餐前分泌峰的中樞機(jī)制還需要進(jìn)一步研究。
　　 禁食能引起小鼠胃粘膜NUCB2/nesfatin-1表達(dá)減少，MSG損毀小鼠弓狀核后，與對(duì)照組相比在禁食前后胃粘膜NUCB2/nesfatin-1表達(dá)并沒(méi)有明顯變化，說(shuō)明弓狀核損毀并沒(méi)有影響到胃粘膜NUCB2/nesfatin