海人酸致癇大鼠中神經(jīng)肽Ghrelin與Nesfatin-1表達變化及其意義研究.pdf

1、目的：建立海人酸癲癇動物模型，觀察神經(jīng)肽Ghrelin與Nesfatin-1在海人酸致癇大鼠癲癇發(fā)作后不同時期未治療與治療過程中的變化特征，初步探討其表達意義，以期在癲癇診治和療效評估中建立更為便捷、敏感的方法，為更深入的研究癲癇發(fā)病機制提供理論依據(jù)。
　　方法：雄性SD大鼠96只，隨機分為空白對照組（不給予干預(yù)措施）、假手術(shù)對照組（注入等量生理鹽水）、致癇后生理鹽水灌胃組（NS組）和致癇后丙戊酸鎂灌胃組（VPA組），后兩組又各分

2、為3h、6h、12h、24h、3d、7d、14d七個時點亞組，每組均6只。致癇組在立體定向操作下向大鼠腦內(nèi)杏仁核局部注射海人酸1.0μl，建立癲癇動物模型，觀察致癇大鼠的行為學(xué)和腦電圖改變。處死大鼠后，應(yīng)用HE染色、Nissl染色等技術(shù)檢測其病理學(xué)變化，放射免疫分析法（RIA）、酶聯(lián)接免疫吸附法（ELISA）和免疫組化方法檢測血清和下丘腦中Ghrelin、Nesfatin-1表達水平。
　　結(jié)果：1.利用精確的立體定向方法將海人酸

3、注射到84只致癇組大鼠的杏仁核建立癲癇動物模型，誘發(fā)出癲癇的大鼠82只，成功率為97.62％。通過HE染色和Nissl染色可見致癇大鼠神經(jīng)元形態(tài)學(xué)改變：發(fā)作急性期神經(jīng)元細(xì)胞排列不整齊，星形細(xì)胞明顯水腫、變性；發(fā)作靜止期神經(jīng)元幾乎完全缺失，膠質(zhì)疤痕形成；發(fā)作慢性期神經(jīng)元已經(jīng)消失，出現(xiàn)神經(jīng)元吞噬現(xiàn)象。
　　2.KA致癇大鼠血清Ghrelin和Nesfatin-1的動態(tài)變化：RIA檢測結(jié)果顯示空白對照組和假手術(shù)對照組間無統(tǒng)計學(xué)差異(p>

4、0.05)；而與對照組相比，NS組和VPA組各時點血清中Ghrelin的表達水平均降低(p<0.05)，以NS組的降低更為明顯；VPA組與NS組相比較，VPA組各相應(yīng)時點血清中的Ghrelin表達水平都顯著高于NS組(p<0.05)，但仍然低于對照組水平。ELISA檢測結(jié)果顯示空白對照組和假手術(shù)對照組間無統(tǒng)計學(xué)差異(p>0.05)；而與對照組相比，NS組和VPA組各時點血清中Nesfatin-1的表達水平均升高(p<0.05)，以NS組

5、的升高更為明顯；VPA組與NS組相比較，VPA組各相應(yīng)時點血清中的Nesfatin-1表達水平都顯著低于NS組(p<0.05)，但仍然高于對照組水平。
　　3.KA致癇大鼠下丘腦Ghrelin和Nesfatin-1的動態(tài)變化：免疫組化結(jié)果顯示：空白對照組和假手術(shù)對照組間無統(tǒng)計學(xué)差異(p>0.05)。與對照組相比，NS組和VPA組各時點下丘腦中Ghrelin的表達水平均降低(p<0.05)，VPA組與NS組相比較，VPA組各相應(yīng)時點

6、下丘腦中Ghrelin的表達水平都有所升高，尤其是在藥物灌胃后的24h、7d和14d有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)，但仍然低于對照組水平；NS組和VPA組各時點下丘腦中Nesfatin-1的表達水平均升高(p<0.05)，VPA組與NS組相比較，VPA組各相應(yīng)時點下丘腦中的Nesfatin-1表達水平都有所降低，并且在藥物灌胃后的各個時點都有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)，但仍然高于對照組水平。
　　結(jié)論：1.立體定向操作下在腦內(nèi)局部顯