海人酸致癇模型大鼠腦組織中orexin mRNA及陽性細胞的表達.pdf

1、目前的抗癲癇藥物大多通過降低神經元興奮性或增加抑制性神經遞質起作用。癲癇的發(fā)生被認為是中樞內γ-氨基丁酸(GABA)抑制作用減弱或缺乏的結果。Orexin又稱hypocretin，1998年發(fā)現(xiàn)于下丘腦，與食欲有關，包括orexin-A和orexin-B(又稱為hypocretin-1和-2)，均為orexin前體的分解產物，其受體有2種亞型D--orexin1R及orexin2R，廣泛分布于整個中樞神經系統(tǒng)，此后又發(fā)現(xiàn)其與交感神經活動

2、，以及睡眠與覺醒狀態(tài)的調控有關，而對于其與癲癇的有關研究，有實驗證實orexin能增強GABA電流，反復癲癇發(fā)作患者腰穿腦脊液中orexin-A濃度少于非癲癇患者。因此，orexin可能與癲癇的發(fā)生或控制有關。
　　本研究采用海人酸腹腔注射誘發(fā)大鼠癲癇急性發(fā)作，并分別在發(fā)作終止后的第8h、1d、3d、7d和慢性復發(fā)時間點行實時逆轉錄PCR方法檢測大鼠大腦皮層、海馬和下丘腦中的prepro-orexin mRNA表達量，免疫組化方法

3、檢測prepro-orexin，orexin-A和orexin-B免疫反應陽性細胞及其神經纖維數(shù)量，以闡明orexin在癲癇發(fā)作中的作用。結果如下：
　　1.實時逆轉錄PCR檢測prepro-mRNA表達：大鼠致癇發(fā)作中止后，其prepro-orexin mRNA表達量在皮層與海馬部位呈現(xiàn)先增高后回復趨勢，且在皮層與海馬變化趨勢大體一致，在1d組處prepro-orexin mRNA表達量增高均達到最大量，相對于對照組，倍數(shù)分別為

4、3.170857±0.271和2.788±0.075；而在下丘腦處則呈現(xiàn)先減少后回復趨勢，其表達量在1d組處達到最少，為對照組的0.597±0.020倍。
　　2.免疫組化檢測：
　　(1)prepro-orexin免疫陽性細胞分布在下丘腦和穹窿周圍核；各組之間prepro-orexin陽性細胞數(shù)差異并不顯著，但其變化曲線總體是下降的，尤其在致癇后的第7天出現(xiàn)了變化較大的減少；prepro-orexin免疫反應陽性神經纖維數(shù)

5、量稀少，主要分布在下丘腦、丘腦室旁核及海馬。
　　(2)Orexin-A免疫陽性細胞分布集中于下丘腦和穹窿周圍核；8h組細胞數(shù)顯著減少，與其他各區(qū)組差異均有統(tǒng)計學意義；其他相鄰組間差異并不具有統(tǒng)計學意義；整體細胞數(shù)變化，呈現(xiàn)出先減少，后回復，再減少趨勢；orexin-A神經纖維的檢測，其在中樞神經系統(tǒng)分布廣泛，8h組顯著增加，與其他各組相比，除1d組外，其值差異均具有統(tǒng)計學意義，神經纖維曲線變化呈現(xiàn)先升高，后下降，再次升高的趨勢。

6、
　　(3)Orexin-B免疫陽性細胞的分布局限于下丘腦和穹窿周圍核，在海馬有可疑的陽性，8h組陽性最高，其次3d組；細胞數(shù)呈現(xiàn)為先減少后回復，之后減少再回復趨勢，在7d組處顯著減少，與其他各組差異均有統(tǒng)計學意義；orexin-B神經纖維的檢測，其在中樞神經系統(tǒng)分布廣泛，數(shù)量呈現(xiàn)出與其細胞數(shù)相反的變化。
　　綜上所述，Prepro-rexin mRNA，orexin細胞數(shù)及其神經纖維在大鼠癲癇發(fā)作后的變化，表明其可能參與了