PVL新生大鼠腦組織ephrin—B3mRNA表達(dá)及神經(jīng)細(xì)胞凋亡變化.pdf

1、目的: 1．建立新生大鼠腦室周圍白質(zhì)軟化(pcriventricular leukomalacia，PVL)模型，觀察新生大鼠PVL時(shí)腦組織病理學(xué)改變。 2．研究正常新生大鼠和PVL大鼠不同時(shí)間點(diǎn)腦組織ephrin-B3mRNA的表達(dá)變化，以及神經(jīng)細(xì)胞凋亡的變化。 3．探討ephrin-B3與神經(jīng)細(xì)胞凋亡的關(guān)系。 4．探討ephrin-B3在PVL損傷及CNS神經(jīng)再生抑制機(jī)制中的意義。 方法:

2、 160只2日齡新生SD大鼠，隨機(jī)分為2組，實(shí)驗(yàn)組(PVL組)86只，對(duì)照組(假手術(shù)組)74只，缺氧缺血(Hypoxic-ischemic，HI)后實(shí)驗(yàn)組死亡14只，對(duì)照組死亡2只，故進(jìn)入實(shí)驗(yàn)的兩組均為72只。采用Back等的方法建立PVL模型，分別于缺氧后0h、8h、24h、48h、72h、7d處死，HE染色觀察新生大鼠PVL時(shí)腦組織病理學(xué)改變；DAPI染色檢測(cè)缺氧缺血后不同時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)細(xì)胞凋亡；熒光定量RT-PCR檢測(cè)缺氧缺血后不

3、同時(shí)間點(diǎn)腦組織ephrin-B3mRNA表達(dá)變化。SPSS11.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果: 1．腦組織HE染色光鏡觀察：對(duì)照組細(xì)胞排列有序、胞核大、左右側(cè)腦室對(duì)稱。PVL組缺氧缺血后24h即見胼胝體細(xì)胞稀疏、排列紊亂；48小時(shí)紋狀體內(nèi)細(xì)胞稀疏、出現(xiàn)核固縮；7d可見側(cè)腦室旁白質(zhì)呈篩網(wǎng)狀壞死。 2．ephrin-B3mRNA的表達(dá)變化：對(duì)照組大鼠腦白質(zhì)中ephrin-B3mRNA表達(dá)各時(shí)

4、間點(diǎn)無明顯變化，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；實(shí)驗(yàn)組大鼠腦白質(zhì)中ephrin-B3mRNA表達(dá)在缺氧缺血后8h開始升高，72小時(shí)達(dá)到峰值，7天開始下降，組內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)兩兩比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，與對(duì)照組比較，在8h、24h、48h、72h、7d差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 3．細(xì)胞凋亡檢測(cè)：對(duì)照組大鼠腦室周圍白質(zhì)紋狀體、胼胝體區(qū)在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)均有少量凋亡細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)組大鼠紋狀體和胼胝體區(qū)細(xì)胞凋亡指數(shù)(apo

5、ptosis index,AI)在缺氧缺血后8小時(shí)開始升高，48小時(shí)達(dá)到高峰，72小時(shí)開始降低，與對(duì)照組相比，在8h、24h、48h、72h差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，7天時(shí)與對(duì)照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 結(jié)論: 1．腦組織HE染色光鏡觀察發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組大鼠缺氧缺血后出現(xiàn)細(xì)胞稀疏、排列紊亂、核固縮、側(cè)腦室旁白質(zhì)篩網(wǎng)狀壞死，符合PVL病理改變，且出現(xiàn)生長發(fā)育不良、神經(jīng)行為異常，證實(shí)PVL模型制作成功。

6、 2．新生大鼠PVL時(shí)，腦白質(zhì)ephrin-B3mRNA表達(dá)顯著增加，而對(duì)照組ephrin-B3mRNA表達(dá)幾乎沒有變化，提示ephrin-B3參與了PVL缺氧缺血性腦損傷，可能與CNS神經(jīng)元再生抑制機(jī)制有關(guān)。 3．新生大鼠PVL時(shí)，腦組織細(xì)胞凋亡指數(shù)較對(duì)照組明顯增加，證實(shí)細(xì)胞凋亡仍為未成熟鼠腦缺氧缺血(Hypoxic-ischemic，HI)損傷的主要病理形式，其參與了PVL的損傷過程。 4．新生大鼠PVL時(shí)，腦組