凋亡誘導(dǎo)因子在慢性氟中毒大鼠腦組織神經(jīng)細(xì)胞凋亡中的作用.pdf

1、目的：通過(guò)檢測(cè)慢性氟中毒大鼠腦組織中神經(jīng)細(xì)胞凋亡率、凋亡誘導(dǎo)因子（apoptosis-inducing factor，AIF）和相關(guān)凋亡因子caspase在蛋白表達(dá)的水平，了解AIF介導(dǎo)的非caspase依賴性細(xì)胞凋亡途徑是否參與慢性氟中毒大鼠大腦神經(jīng)細(xì)胞凋亡過(guò)程，并探討其發(fā)生機(jī)制。
　　方法:實(shí)驗(yàn)用Sprague Dawley（SD）大鼠60只，雌雄各半,隨機(jī)分為兩組，即正常對(duì)照組：自由飲用自來(lái)水，飲水中含氟量<0.5 mg/L

2、；染氟組：飲水中加入氟化鈉，使氟含量為50 mg/L。兩組均飼以標(biāo)準(zhǔn)飼料（氟含量小于0.5mg/kg），實(shí)驗(yàn)期為10個(gè)月。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，觀察大鼠氟斑牙發(fā)生情況；用氟離子選擇電極法測(cè)定大鼠尿氟、骨氟含量；HE染色觀察大鼠大腦神經(jīng)組織學(xué)改變，尼氏染色觀察大鼠腦組織神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)尼氏小體形態(tài)學(xué)改變；免疫組化檢測(cè)大腦皮質(zhì)及海馬AIF分布；蛋白印跡（Western blotting）檢測(cè)大腦皮質(zhì)及海馬AIF、caspase-3及caspase-9的蛋白

3、表達(dá)水平；流式細(xì)胞術(shù)（flow cytometr，F(xiàn)CM）檢測(cè)大鼠大腦皮質(zhì)及海馬細(xì)胞凋亡率。
　　結(jié)果：染氟成年大鼠出現(xiàn)不同程度的氟斑牙，尿氟及骨氟含量明顯高于對(duì)照組(P<0.05)；HE染色病理形態(tài)學(xué)檢查顯示，各組大鼠腦組織未見(jiàn)明顯異常改變，尼氏染色發(fā)現(xiàn)染氟組大鼠腦組織神經(jīng)細(xì)胞中尼氏體數(shù)量較對(duì)照組顏色變淺，數(shù)量減少；免疫組化結(jié)果顯示，氟中毒組海馬及皮質(zhì)頂葉神經(jīng)細(xì)胞AIF陽(yáng)性表達(dá)率與染色程度明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0

4、.05），但在額葉和枕葉差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；蛋白印跡結(jié)果顯示，染氟組大鼠腦組織神經(jīng)細(xì)胞線粒體內(nèi)AIF（57-kDa）的蛋白表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組（P＜0.01），而細(xì)胞核中AIF的蛋白表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組（P＜0.01）；染氟組大鼠腦組織神經(jīng)細(xì)胞含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（cysteinyl aspartate specific proteinase，Caspase）-3的蛋白表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組（P<0.01），