不同純度大鼠胰島中Nestin、Ngn3陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：制備不同純度的大鼠胰島，探討不同純度大鼠胰島中NestinNgn3陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)。 方法：30只雄性SD大鼠隨機(jī)分成3組，采用膠原酶V型胰管灌注分離消化及不連續(xù)密度梯度法Ficoll一400純化，制備三種不同純壓的胰島。I組(N=10)：胰島沉淀物不進(jìn)行純化；II組(N--10)：胰島沉淀物中依次加入25％的Ficoll-400純化；III組(N=10)：胰島沉淀物依次加入25％、11％的Ficoll-400純化。應(yīng)用免疫

2、組化及RT—PC}技術(shù)檢測(cè)Nestin、Ngn3蛋白及mRNA在三種不同純度胰島中的表達(dá)。 結(jié)果： l采用連續(xù)消化和不同的純化方法獲得三種不同純度的胰島，組：43．6士6．29％；II組：65．3±4．40％；III組：77．64-6．36％。各組間具有顯著差異性(P<0．05)。另外，得到三組胰島產(chǎn)量分別為，I組：791．74-72．87；II組：722．6~52．41；III組：709．2~52．90。II、III組

3、間不具有顯著差異性(P>0．05)，而I組與II、III組間有顯著差異性(P<0．05)。 2免疫組化結(jié)果分析，不同純度胰島中Nestin平均灰度值，I組：116．174-4．36¨；II組：134．26±3．2625；III組：147．91±3．9433，各組間具有顯著差異性(P<0．05)。 3免疫組化結(jié)果分析，不同純度胰島中Ngn3平均灰度值，I組：127．4354-4．8139；II組：140．915+5．249

4、1；III組：154．72~4．9666,各組間具有顯著差異性(P<0．05)。 4RT—PCR結(jié)果分析，不同純度胰島中NestinmRNA的表達(dá)／p-action光密度比值，I組：0．50954-0．0443；II組：0．41824-0．0455；III組：0．29764-0．0339。各組間具有顯著差異性(P<0．05)。 5RT—PCR結(jié)果分析，不同純度胰島中Ngn3mRNA的表達(dá)／p-action光密度比值，I組

5、：0．46794-0．0372；II組：0．34474-0．0350；III組：0．21814-0．0462。各組間具有顯著差異性(P<0．05)。 結(jié)論： 1采用三種不同純化方法可制備不同純度的胰島，膠原酶經(jīng)胰管灌注消化和梯度密度純化是關(guān)鍵性因素。 2分離純化的過(guò)程中存在部分胰島的丟失。 3Nestin、Ngn3在三種純度胰島中均有表達(dá)，低純度胰島中Nestin、Ngn3陽(yáng)性細(xì)胞較多。 4供體胰