干細胞抗原陽性細胞向肝細胞分化的初步研究.pdf

1、目的：肝細胞移植是20世紀70年代發(fā)展起來的一項細胞移植工程技術(shù)，與原位肝移植比較，它具有操作簡單和可重復(fù)進行的特點。但由于目前主要的供體來源是成熟的肝細胞和胎肝細胞，仍面臨移植后的肝細胞增殖能力差、受損肝實質(zhì)的替代程度欠佳、肝功能支持的時間短以及免疫排斥等諸多問題，使得移植效果仍欠理想。鑒于上述應(yīng)用成熟肝細胞和胎肝細胞進行移植的缺陷以及骨髓干細胞體外增殖的困難造成供體的缺乏；并且根據(jù)骨髓與肝臟間存在聯(lián)系，在胚胎發(fā)育一定時期內(nèi)含大量的造

2、血干細胞，具有更強的自我復(fù)制增殖和分化潛能。本研究利用胚胎時的肝臟具有豐富的造血干細胞，通過免疫磁性分離法分離胚胎造血干細胞中的胎肝干細胞抗原陽性細胞(Sca-1+細胞)亞群，建立合適的體外誘導(dǎo)體系，誘導(dǎo)Sca-1+細胞向肝細胞或肝細胞前體分化。并且研究胚胎肝臟Sca-1+細胞向肝細胞分化的機制，為解決移植干細胞的供體缺乏和移植后細胞增生困難提供新的思路及完善造血干細胞橫向分化的理論，并且為提高肝細胞移植的臨床療效和擴展造血干細胞的應(yīng)用

3、范圍提供理論和實驗依據(jù)。 方法：取孕14.5天的C57BL/6j母鼠剖腹取出胎鼠，剪碎肝臟制成單細胞懸液，離心去除細胞碎片后，進行Sca-1+細胞的分離。于分離前后分別通過臺盼藍染色觀察細胞活性和用流式細胞術(shù)分析Sca-1+細胞的純度和產(chǎn)量。把Sca-1+細胞分成兩個組，實驗組在培養(yǎng)體系中同時加入HGF和aFGF兩種促肝干細胞增殖分化的因子，對照組不加入任何生長因子，觀察肝細胞的增殖和分化。于誘導(dǎo)的第0、7、14、21和28天分

4、別進行細胞形態(tài)觀察，半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR法)檢測細胞白蛋白(ALB)、轉(zhuǎn)甲狀腺蛋白mRNA水平表達，免疫細胞化學法檢測ALB、AFP和CK8/18蛋白水平的表達以及通過細胞糖原染色和尿素合成功能來檢測分化細胞是否具有肝細胞功能。 結(jié)論：1.通過免疫磁性分離法可分離出胎肝造血干細胞Sca-1+細胞亞群。并且證實了用MiniMACS方法分離出來的Sca-1+細胞具有純度高、回收率高和細胞存活率高的特點。 2