SAMP8小鼠在正中隆起Nestin、Sox2和BrdU陽性細胞的形態(tài)學觀察.pdf

1、目的:對比觀察SAMP8小鼠與SAMR1小鼠正中隆起Nestin、Sox2和BrdU陽性細胞的形態(tài)和分布。
　　方法:SAMP8小鼠16只，清潔級，雌雄不限，體質量26g±2g;SAMR1小鼠8只，清潔級，雌雄不限，體質量31g±3g。將實驗動物隨機分為兩組:①正常組（n SA8=8，n SAMR1=4）:不作任何處理;②模型組(n SAMP8=8，n SAMR1=4):腹腔注射BrdU生理鹽水溶液，連續(xù)三日，每日兩次，于每日的同

2、一時間注射，兩次注射時間間隔2小時。
　　1、標本制備
　　1.1正常動物標本制備
　　用水合氯醛(0.3ml/100g)將正常組麻醉后，自主動脈灌注4％多聚甲醛磷酸鹽緩沖液(0.1 mol/L，PH7.2)進行前固定，立即取腦，后固定。將組織標本隨機分組，一組（n SAMP8=4，n SAMR1=2）經(jīng)脫水，透明，包埋，選取含正中隆起部分，石蠟切片機冠狀面切片，厚度約為5μm，制成石蠟切片。另一組(n SAMP8=4

3、，n SAMR1=2)先后經(jīng)15％蔗糖溶液和30％蔗糖溶液脫水，選取含正中隆起部分，恒溫冰凍切片機冠狀面切片，厚度約為10μm，制成冰凍切片。對實驗動物的處置符合動物倫理學要求。
　　1.2 BrdU標記動物模型標本取材
　　將模型組按照100mg/kg進行腹腔注射BrdU生理鹽水溶液，連續(xù)三日，每日兩次，于每日的同一時間注射，兩次注射時間間隔2小時。第四日用水合氯醛(0.3ml/100g)將模型組麻醉后，自主動脈灌注4％多

4、聚甲醛磷酸鹽緩沖液(0.1 mol/L，PH7.2)進行前固定，立即取腦，后固定。將組織標本隨機分組，一組（n SAMP8=4，n SAMR1=2）經(jīng)脫水，透明，包埋，選取含正中隆起部分，石蠟切片機冠狀面切片，厚度約為5μm，制成石蠟切片。另一組（n SAMP8=4，n SAMR1=2）先后經(jīng)15％蔗糖溶液和30％蔗糖溶液脫水，選取含正中隆起部分，恒溫冰凍切片機冠狀面切片，厚度約為10μm，制成冰凍切片。對實驗動物的處置符合動物倫理學要

5、求。
　　2、染色
　　2.1免疫組織化學染色
　　將上述石蠟切片分別經(jīng)Nestin、Sox2和BrdU免疫組織化學染色，使用中性樹膠封片后Olympus BX-UCB觀察照相。
　　2.2免疫熒光雙標染色
　　將上述冰凍切片分別經(jīng)Nestin+Sox2和BrdU+Sox2免疫熒光雙標染色后，使用抗熒光衰減封片劑封固后Olympus BX-UCB觀察照相。
　　3、統(tǒng)計學處理
　　實驗結果中所示

6、陽性細胞采用專業(yè)圖像分析軟件Image-Pro Plus6.0測定陽性細胞數(shù)，計算陽性率。
　　結果:
　　1免疫組織化學結果觀察
　　1.1 Nestin
　　Nestin免疫陽性細胞在ME處明顯表達，在ME室管膜帶、內帶呈強陽性分布，基突伸向外帶的血管壁周圍。SAMP8(陽性細胞表達率:45.01±3.46％)較SAMR1（陽性細胞表達率:29.81±4.55％）陽性細胞總數(shù)量多;SAMP8內帶靠近外帶的一側

7、陽性細胞數(shù)量較靠近室管膜帶的一側多;SAMR1內帶靠近外帶的一側陽性細胞數(shù)量較靠近室管膜帶的一側少。
　　1.2 Sox2
　　Sox2免疫陽性細胞在ME室管膜帶單層整齊分布，中央部少，兩側部略多，染色較第三腦室室管膜Sox2免疫陽性細胞淺。Sox2免疫陽性細胞在ME內帶少量分布。SAMR1（陽性細胞表達率:46.40±2.98％）較SAMP8(陽性細胞表達率:24.75±3.12％)陽性細胞總數(shù)量多，且在SAMP8內帶靠近

8、外帶的一側幾乎未見陽性細胞分布，SAMR1可見陽性細胞分布。ME外帶細胞稀疏，腹側可見多個較大的血管。
　　1.3 BrdU
　　BrdU陽性細胞在ME內帶零星分布，SAMP8(陽性細胞表達率:4.31±0.27％)較SAMR1（陽性細胞表達率:2.16±0.10％）陽性細胞總數(shù)量略多，SAMP8陽性細胞主要分布于內帶靠近外帶的一側，SAMR1陽性細胞主要分布于內帶靠近室管膜帶的一側，胞核較大，核內染色不均勻，偶見成對的分裂

9、期的陽性細胞。
　　2免疫熒光結果的觀察
　　2.1 Nestin、Sox2免疫熒光雙標
　　在ME的內帶可見少量Nestin、Sox2免疫熒光雙標陽性細胞表達。
　　2.2 BrdU、Sox2免疫熒光雙標
　　在ME的內帶可見少量BrdU、Sox2免疫熒光雙標陽性細胞表達。
　　結論:
　　1、Nestin免疫陽性細胞于ME的室管膜帶、內帶密集分布，其突起較長，由背側向腹側走行，基突伸向外帶血

10、管旁。SAMP8較SAMR1陽性細胞數(shù)量多，內帶靠近外帶側比內帶靠近室管膜帶側表達強。
　　2、Sox2免疫陽性細胞在ME室管膜帶密集分布，內帶稀疏分布;SAMP8較SAMR1陽性細胞數(shù)量少，內帶靠近室管膜帶側比內帶靠近外帶側帶側表達強。
　　3、BrdU免疫陽性細胞在ME內帶零星分布;SAMP8較SAMR1陽性細胞數(shù)量略多，內帶靠近外帶側表達略強。
　　4、Nestin、Sox2免疫熒光雙標細胞和BrdU、Sox2免