下咽癌FADU細胞系中CD133陽性細胞的基礎(chǔ)研究.pdf

1、[研究背景與目的]
　　 下咽癌是一種頭頸部惡性腫瘤,是上消化道及上呼吸道惡性程度最高的腫瘤之一,其發(fā)生的機制并不清楚。預(yù)后差的主要因為包括局部復(fù)發(fā)、易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠處轉(zhuǎn)移。由于臨床后果差,對患者生命及生活質(zhì)量影響嚴重,是當前耳鼻咽喉.頭頸外科的研究重點。
　　 腫瘤干細胞是近年來對腫瘤發(fā)生發(fā)展過程的一種新的理論觀點,新觀點認為腫瘤組織中只有極少量的腫瘤細胞有干細胞樣作用,它們是一群數(shù)量較少但具有無限自我更新潛能并能

2、促使腫瘤形成的細胞,在腫瘤生長中起著決定性作用。這類細胞有較強的抗拒放療及化療的作用,并可能與免疫逃逸,生長信號異常傳遞等多種腫瘤的重要生物學特點有關(guān)。目前已從腦腫瘤,白血病,乳腺癌,喉癌,肺癌等多種腫瘤組織中提取到了腫瘤干細胞,并進行了相關(guān)細胞學及分子生物學研究。從當前的研究結(jié)果來看,不同的腫瘤中,盡量其腫瘤干細胞生物學特性有共同點,如無限自我更新潛能,分化能力等,但腫瘤干細胞其表面標志物是不盡相同的,這提示我們需要對不同的腫瘤進行相

3、應(yīng)研究,了解不同腫瘤中腫瘤干細胞的標志物特點。
　　 近年來,許多研究證實,CD133是腫瘤干細胞的重要標志物之一。CD133是一種分子量為120 kDa,具有5個跨膜區(qū)的糖蛋白,屬于一種早期抗原。在2000年英國舉行的第7屆國際人類白細胞分化抗原研討會上被正式命名為CD133。它是一種正常的造血干細胞表面標志物,它的一個顯著特點就是:CD133的表達隨著細胞的分化迅速下調(diào),選擇性地在骨髓和外周血造血干細胞及內(nèi)皮祖細胞表達,但在

4、成熟內(nèi)皮細胞上不表達,是一個重要的分離和鑒定造血干或祖細胞的分子標志。
　　 侵襲能力是惡性腫瘤的標志性行為特點之一,是當前研究惡性腫瘤行為特點的一個重要方向。目前利用Transwell小室是體外研究腫瘤細胞侵襲和轉(zhuǎn)移行為的簡便且快速的方法。
　　 本研究擬以CD133為分選標志物,從人類FADU細胞系中分選出CD133陽性細胞,研究其數(shù)量分布特點,形態(tài)學特點,并擬通過應(yīng)用Transwell小室的研究方法,研究在FADU

5、細胞系中CD133陽性細胞的侵襲能力,從而為未來完善對CD133陽性細胞擁有的細胞學特點研究提供相應(yīng)的細胞學實驗室基礎(chǔ)。
　　 第一部分
　　 下咽癌FADU細胞系中CD133表達情況研究
　　 [目的]研究下咽癌FADU細胞系中CD133表達情況。
　　 [方法]對下咽癌FADU細胞進行培養(yǎng)和傳代,分別應(yīng)用免疫細胞化學和流式細胞儀的方法對下咽癌FADU細胞系中CD133表達情況進行研究。
　　

6、[結(jié)果]免疫細胞化學的方法發(fā)現(xiàn),在下咽癌FADU細胞中CD133陽性細胞僅占少數(shù),而在利用流式細胞儀的方法研究后發(fā)現(xiàn),FADU細胞中CD133陽性細胞比例僅為2.01％。
　　 [結(jié)論]CD133陽性細胞數(shù)量在FADU細胞系中占少數(shù)。
　　 第二部分
　　 下咽癌FADU細胞系中CD133陽性細胞的分選
　　 [目的]應(yīng)用可靠的分選手段,從下咽癌FADU細胞系中分選CD133陽性細胞并鑒定。
　　

7、 [方法]對下咽癌FADU細胞進行培養(yǎng)和傳代,應(yīng)用免疫磁珠分選技術(shù)進行CD133陽性細胞的分選。
　　 [結(jié)果]應(yīng)用免疫磁珠分選技術(shù)后,可很好地分選出CD133陽性細胞,其分選后CD133陽性細胞純度可達91.2％。
　　 [結(jié)論]免疫磁珠分選技術(shù)可很好地應(yīng)用于下咽癌FADU細胞系中CD133陽性細胞的分選。
　　 第三部分
　　 下咽癌FADU細胞系中CD133陽性細胞的侵襲能力研究
　　 [目

8、的]研究下咽癌FADU細胞系中CD133陽性細胞的侵襲能力。
　　 [方法]對應(yīng)用免疫磁珠分選技術(shù)進行分選后的CD133陽性細胞、陰性細胞分別應(yīng)用Transwell小室進行侵襲能力研究,倒置相差顯微鏡下照相,計數(shù)遷移到上室基質(zhì)膜外表面的細胞數(shù)目,以能穿過基質(zhì)膜的細胞數(shù)目多少表示細胞的侵襲能力強弱。每個樣本計數(shù)5個視野(×200)的細胞數(shù),取其平均值進行比較。
　　 [結(jié)果]與CD133陰性細胞相比,CD133陽性細胞透膜