人上皮性卵巢癌細(xì)胞中CD133和CD44的表達(dá)狀況及其功能研究.pdf

1、研究背景和目的：腫瘤干細(xì)胞(cancer stem cells，CSC)理論認(rèn)為只有存在于腫瘤中的少量干細(xì)胞性質(zhì)的細(xì)胞群體對(duì)腫瘤發(fā)生和發(fā)展起著決定作用，這一理論的提出為腫瘤研究提供了新的方向，對(duì)腫瘤的早期診斷、等級(jí)評(píng)估及預(yù)后都有重要意義，為臨床上徹底治愈腫瘤帶來(lái)希望。卵巢癌嚴(yán)重危害女性健康，研究卵巢癌尤其是上皮性卵巢癌的有效治療方法具有重大意義，腫瘤干細(xì)胞理論的提出為卵巢癌的早期診斷和徹底治療提供了新的思路。CSC分離的關(guān)鍵問(wèn)題是尋找合

2、適的表面標(biāo)記，本實(shí)驗(yàn)旨在探討人上皮性卵巢癌細(xì)胞中CD133和CD44的表達(dá)狀況及其對(duì)自我更新、分化增殖能力的影響。 材料和方法： 1.本研究所選用的卵巢癌組織標(biāo)本均取自山東大學(xué)齊魯醫(yī)院婦產(chǎn)科2007年5月至2007年11月間手術(shù)切除并經(jīng)病理證實(shí)為上皮性卵巢癌的標(biāo)本，同時(shí)術(shù)中采集腹水分離培養(yǎng)原代細(xì)胞。上皮性卵巢癌細(xì)胞株SKOV3、3AO、A2780、OVCR3均來(lái)自山東大學(xué)齊魯醫(yī)院腫瘤中心中心實(shí)驗(yàn)室。 2.流式細(xì)胞

3、術(shù)檢測(cè)CD133和CD44在SKOV3、3AO、A2780、OVCR3和原代培養(yǎng)細(xì)胞中的表達(dá)率。 3.免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)卵巢癌組織標(biāo)本中CDl33和CD44分布情況。 4.免疫磁珠法(magnetic beads cell sorting，MACS)分選出SKOV3細(xì)胞中CDl33+細(xì)胞。 5.CD133+細(xì)胞自我更新、分化增殖能力檢測(cè)：用含20％新生牛血清(neonatalboyine serum，NBS)的

4、培養(yǎng)液培養(yǎng)CD133+細(xì)胞，于分離后即刻、培養(yǎng)第3天、培養(yǎng)第5天三個(gè)時(shí)間點(diǎn)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其中CD133+。細(xì)胞所占的比例。 6.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：數(shù)據(jù)分析采用sPSS13.0軟件，多重均數(shù)之間比較采用單因素方差分析，兩組均數(shù)比較用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有顯著性。 結(jié)果： 1.原代培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)狀況顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞形態(tài)扁平，較為規(guī)整，呈多角形，第一代細(xì)胞?；祀s有非腫瘤細(xì)胞，一般傳至第二代以后非腫瘤細(xì)胞少見(jiàn)，細(xì)

5、胞之間相互銜接緊密排列。細(xì)胞每7天傳代一次。 2.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD133和CD44的表達(dá)率SKOV3、A2780、3AO、OVCR3中CD133的表達(dá)率分別為0.72％±0.10％、0.94％±0.22％、0.81％±0.50％、0.77％±0.28％，四種細(xì)胞系間CD133的表達(dá)率無(wú)顯著性差異(P=0.85)。SKOV3中CD44的表達(dá)率為96.92％±1.74％，而A2780、3AO、OVCR3中均為檢測(cè)到CD44的表達(dá)。

6、原代培養(yǎng)細(xì)胞中CD133的表達(dá)率，第Ⅲ代培養(yǎng)細(xì)胞共檢測(cè)了6例，其表達(dá)率為1.27％±0.54％；第1代細(xì)胞檢測(cè)6例，其表達(dá)率為0.47％±0.13％。第Ⅲ代細(xì)胞CD133表達(dá)率高于第1代細(xì)胞(P=0.002)；與細(xì)胞系比較，第Ⅲ代細(xì)胞CD133表達(dá)率高于SKOV3(P=0.046)，與A2780、3AO、OVCR3差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。第Ⅲ代培養(yǎng)細(xì)胞中CD44的表達(dá)率為79.48％±13.21％，第Ⅰ代細(xì)胞為93.42％±0.65％。第Ⅲ代

7、細(xì)胞CD44表達(dá)率低于第Ⅰ代細(xì)胞(P=0.049)；第Ⅲ代細(xì)胞CD44表達(dá)率亦低于SKOV3細(xì)胞中CD44表達(dá)率(P=0.002)。由于原代培養(yǎng)細(xì)胞檢測(cè)例數(shù)少，未發(fā)現(xiàn)CD133、CD44表達(dá)率與患者的病理類(lèi)型、分化程度等臨床指標(biāo)之間的關(guān)系。 3.免疫組織化學(xué)染色結(jié)果DAB陽(yáng)性染色為棕黃色，所檢測(cè)的12例卵巢癌組織標(biāo)本中CD133和CD44均呈陽(yáng)性，且分布廣泛。 4.CD133+細(xì)胞自我更新、分化增殖能力檢測(cè)觀(guān)察CDl33

8、+細(xì)胞生長(zhǎng)狀況，其生長(zhǎng)速度快于CDl33-細(xì)胞(具體數(shù)據(jù)未檢測(cè))，分離后即刻、培養(yǎng)第3天、培養(yǎng)第5天流式細(xì)胞術(shù)所測(cè)CD133+細(xì)胞所占的比例分別為76.74％、11.9l％、2.26％，明顯呈下降趨勢(shì)。 結(jié)論： 1.本研究發(fā)現(xiàn)CD133在0.16％～2.05％的上皮性卵巢癌細(xì)胞中表達(dá)，CD133+細(xì)胞有自我更新能力，能夠產(chǎn)生大量CDl33-細(xì)胞，具有腫瘤干細(xì)胞特征，表明CD133可以作為上皮性卵巢癌腫瘤干細(xì)胞的表面標(biāo)記進(jìn)