雌激素、姜黃素對海人酸杏仁核點燃大鼠行為學及c-Jun和GAD67免疫陽性細胞表達的影響.pdf

1、目的：(1)了解雌激素(estrogen，E)、姜黃素(curcumin，C)對海人酸(kainic acid，KA)杏仁核點燃大鼠癲癇發(fā)作的行為學和腦電圖影響。(2)明確癲癇發(fā)作后大鼠海馬神經(jīng)元損害情況。(3)檢測大鼠海馬中c-Jun和谷氨酸脫羧酶67(glutamatedecarboxylase 67，GAD67)表達的變化，初探雌激素和姜黃素影響癲癇活動的部分生物學機制。 方法：(1)將成年Sprague-Dawley(S

2、D)雌性大鼠(體重250g～280g)行雙側(cè)卵巢切除術(shù)后飼養(yǎng)1周，術(shù)后第8天隨機分為2組：假致癇組(NEP組，n=2只)和致癇組(n=40只)。依據(jù)KA致癇前不同的預處理，致癇組又分為對照組(又稱茶油Oil組，簡稱O組，n=10只)，雌激素組(簡稱E組，11=10只)，雌激素加姜黃素組(簡稱EC組，n=10只)和姜黃素組(簡稱C組，11=10只)。E和EC組每日早9點腹腔注射2mg/kg的17β一雌二醇(溶于茶油中)，EC和C組每日早1

3、0點腹腔注射100 mg/kg的姜黃素(溶于茶油中)，而NEP和O組腹腔注射等量的茶油，共給藥5天。第6天將各組大鼠麻醉后固定于腦立體定位儀下，根據(jù)大鼠腦立體定位圖譜，在右側(cè)杏仁基底核緩慢注入1ug的PBS(NEP組)或KA(致癇組)。參照Racine癲癇發(fā)作分級標準，觀察大鼠致癇后6小時的行為學表現(xiàn)，比較各組致癇大鼠點燃率，潛伏期，到達點燃和重型發(fā)作的時間，及重型發(fā)作嚴重程度評分，并在每組隨機抽取2只大鼠行雙側(cè)海馬深部腦電圖記錄。(2

4、)6小時觀察期結(jié)束后，將各組大鼠灌流后斷頭取腦，做冰凍切片。用甲苯胺藍尼氏小體染色觀察大鼠海馬神經(jīng)元損害情況，用免疫組化方法檢測海馬中c-Jun和GAD67免疫陽性細胞表達的變化。 結(jié)果：(1)本實驗致癇組點燃(連續(xù)3次3級及以上發(fā)作)成功率為90％，NEP組大鼠無癇性發(fā)作表現(xiàn)。點燃大鼠典型癇性活動表現(xiàn)為：注射KA后20～40分鐘左右出現(xiàn)反復的須動、面部抽搐、點頭、流涎、左上肢抽動等部分性發(fā)作，發(fā)作漸趨頻繁，至給藥后90～180

5、分鐘時發(fā)作達到高峰，出現(xiàn)雙側(cè)前肢陣攣并雙后肢站立，甚至三肢或四肢抽搐、站立不穩(wěn)、跌倒和姿勢反射消失。第300分鐘以后發(fā)作較前逐漸減輕。(2)行為學統(tǒng)計結(jié)果顯示，在點燃成功大鼠中，除C組有2只發(fā)作僅達3級外，其余均達4/5級。各組大鼠癇性發(fā)作的潛伏期(明確的Racine 1級發(fā)作)、到達點燃和到達重型發(fā)作(Racine 4/5級)的時間無明顯差異。對達到重型發(fā)作大鼠進行嚴重程度評分，發(fā)現(xiàn)E組評分最高，而EC組最低，較E組降低明顯，有統(tǒng)計學

6、差異，P<0.05。在觀察期的第6個小時，E組大鼠仍然保持很高的驚厥性，Racine評分較其他組別明顯增高，有統(tǒng)計學差異，P<0.01。而EC組在第5、第6小時Racine評分較E組下降明顯，有統(tǒng)計學差異，P<0.05。(3)腦電圖結(jié)果顯示：致癇組大鼠均有癇樣放電出現(xiàn)，證明海人酸致癇模型成功。(4)尼氏小體染色顯示：大鼠杏仁核注射KA同側(cè)(右側(cè))海馬CA3區(qū)、齒狀回門區(qū)神經(jīng)元損害嚴重，其中，雌激素組神經(jīng)元損害最嚴重，而且該組注射對側(cè)(左

7、側(cè))CA3區(qū)也出現(xiàn)了一定程度的損害。病理改變?yōu)椋哄F體細胞排列紊亂，形態(tài)不規(guī)則，胞膜破裂，尼氏小體外露，胞核碎裂、濃縮。各組雙側(cè)CA1區(qū)、齒狀回區(qū)(dentate gyrus，DG)神經(jīng)元均未見到損害。(5)免疫組化結(jié)果顯示：c-Jun免疫陽性細胞主要在大鼠齒狀回區(qū)顆粒細胞層，海馬CA3及CA1區(qū)錐體細胞層表達。GAD67免疫陽性細胞在DG區(qū)顆粒細胞下層、分子層，海馬CA3和CA1區(qū)始層表達，錐體細胞層偶有表達。右側(cè)海馬c-Jun和GAD

8、67免疫陽性細胞數(shù)目表達明顯少于左側(cè)。在左側(cè)海馬，E組各區(qū)c-Jun免疫陽性細胞表達均明顯多于其他組別，C組和O組c-Jun表達最少，EC組c-Jun表達介于E組和C組之間。在CA1區(qū)EC組較E組c-Jun免疫陽性細胞表達下降明顯，有統(tǒng)計學意義，P<0.05。在左側(cè)海馬，O組和E組GAD67免疫陽性細胞表達最少，C組GAD67陽性細胞表達最多， EC組在CA1區(qū)GAD67陽性細胞表達較E組增多明顯，有統(tǒng)計學差異，P<0.05。