GAD67與bNOS在GAD67-GFP基因敲入小鼠嗅球中的表達(dá)和共存研究.pdf

1、GAD67-GFP基因敲入小鼠作為模式實(shí)驗(yàn)動(dòng)物被廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中，尤其是在探測(cè)GAD67靈敏性方面優(yōu)勢(shì)尤為突出，因此GAD67-GFP基因敲入小鼠經(jīng)常被用于GAD67相關(guān)神經(jīng)元-γ氨基丁酸(GABA)能神經(jīng)元的相關(guān)研究中。GABA是一種重要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，已有研究在嗅球各細(xì)胞層中均有GABA的分布。為了更精確的研究GABA在嗅球中的分布我們引入了GAD67-GFP基因敲入小鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。一氧化氮(NO)也是一種重要的神經(jīng)

2、遞質(zhì)。已有研究表明在嗅皮質(zhì)區(qū)，NO與GABA存在著共定位，而且二者在激活NMDA受體通路中存在著協(xié)同作用。然而在嗅球中還缺乏相關(guān)方面的研究。
　　 本實(shí)驗(yàn)首先通過(guò)對(duì)動(dòng)物基因組進(jìn)行PCR擴(kuò)增，對(duì)小鼠進(jìn)行基因型鑒定。取經(jīng)基因型鑒定為陽(yáng)性GAD67-GFP基因敲入小鼠嗅球做冰凍切片。尼氏染色(Nisslstaining)顯示嗅球各細(xì)胞層排布分層。GAD67-GFP與DAPI雙染探查嗅球中各細(xì)胞層中GAD67陽(yáng)性神經(jīng)元的分布比例。免疫熒

3、光雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)，探查GAD67-GFP與一氧化氮合酶(bNOS)在嗅球各細(xì)胞層的分布及共存情況。
　　 基因組PCR基因型鑒定表明陽(yáng)性GAD67-GFP基因敲入小鼠基因組中含有GFP片段即瓊脂糖凝膠電泳中出現(xiàn)750bp條帶。Nissl染色結(jié)果清楚地顯示嗅球共有三個(gè)細(xì)胞層即由表及里依次為：球旁細(xì)胞曾(GL)、僧帽細(xì)胞層(MCL)、顆粒細(xì)胞層(GCL)。GAD67-GFP與DAPI雙染結(jié)果顯示GAD67-GFP在嗅球各細(xì)胞層的分布比例分