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文檔簡介
1、華中科技大學碩士學位論文攜帶GAD67基因真核表達載體的構建及轉染骨髓基質細胞的研究姓名:謝三平申請學位級別:碩士專業(yè):神經(jīng)病學指導教師:陳吉相201005華中科技大學碩士學位論文華中科技大學碩士學位論文3染大鼠骨髓基質細胞,觀察其轉染效果及轉染后GAD67基因在骨髓基質細胞中的表達。[方法方法]利用基因重組技術,用NotI、SpeI分別對pCMV6XL5GAD67質粒進行酶切獲得GAD67基因片段,然后將其插入pDC316CMVEGF
2、P質粒構建pDC316CMVEGFPGAD67真核表達載體,經(jīng)酶切、測序鑒定正確;通過轉基因技術利用脂質體將其導入通過貼壁方法分離培養(yǎng)出來的骨髓基質細胞,熒光顯微鏡下觀察、流式細胞儀檢測其轉染效率,免疫組化檢測GAD67基因的表達。[結果結果]經(jīng)酶切、測序鑒定證實成功構建pDC316CMVEGFPGAD67真核表達載體,其中插入有3.5kbp的人類GAD67cDNA,轉染骨髓基質細胞后熒光顯微鏡下觀察可見大量帶綠色熒光的細胞,經(jīng)流式細胞
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