含報(bào)告基因的凋亡素基因真核表達(dá)載體構(gòu)建研究.pdf

1、研究背景： 近年來，惡性腫瘤對(duì)人類的威脅日趨嚴(yán)重。傳統(tǒng)的腫瘤治療方法存在其局限性。人們正積極研究新的腫瘤治療方法，以期獲得更好的療效。隨著分子生物學(xué)研究的飛速發(fā)展，細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、凋亡的機(jī)制逐漸被認(rèn)識(shí)，一種新的治療方法-基因治療正在成為研究熱點(diǎn)。其中，凋亡素基因能夠特異地誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，在腫瘤治療上的前景尤為突出。凋亡素能選擇性地誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞和轉(zhuǎn)化細(xì)胞發(fā)生凋亡，而并不殺傷人和鼠的正常二倍體細(xì)胞。因此，被認(rèn)為是第一個(gè)真正意義上的

2、選擇性誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、而不損傷正常細(xì)胞的凋亡基因。經(jīng)過研究凋亡素能夠誘導(dǎo)人成骨肉瘤細(xì)胞、肝癌細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞、鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞、宮頸癌細(xì)胞等多種腫瘤細(xì)胞凋亡。凋亡素基因表達(dá)載體的構(gòu)建是凋亡素分子生物學(xué)特點(diǎn)研究及其在腫瘤基因治療方面應(yīng)用的基礎(chǔ)，如何成功構(gòu)建具有較高轉(zhuǎn)染率和更利于結(jié)果觀察的凋亡素基因表達(dá)載體尤為重要。 研究目的： 構(gòu)建含報(bào)告基因的凋亡素基因真核表達(dá)載體。 研究方法： 對(duì)pMD18T-

3、VP3質(zhì)粒進(jìn)行EcorI和BamHI雙酶切，回收366bp(含凋亡素基因完整序列)片段。對(duì)增強(qiáng)型綠熒光蛋白pEGFP-C2質(zhì)粒酶切，回收載體大片段。將凋亡素基因通過連接反應(yīng)，連接到增強(qiáng)型綠熒光蛋白(EGFP)基因C末端的終止密碼前，并使兩者讀框不移位，構(gòu)建成pEGFP-VP3質(zhì)粒。并對(duì)其進(jìn)行酶切分析和測(cè)序鑒定載體結(jié)構(gòu)。 研究結(jié)果： 通過對(duì)構(gòu)建對(duì)的pEGFP-VP3質(zhì)粒酶切、電泳，出現(xiàn)了366bp的電泳條帶，與凋亡素基因片