牛氣管防御素基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及體外抗菌功能研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、牛氣管防御素(bovine tracheal antimicrobial peptide，bTAP)是由美國科學(xué)家Diamond等從牛氣管黏膜上皮細(xì)胞中分離得到的一種陽離子型的抗菌活性小肽，體外實(shí)驗(yàn)表明bTAP具有廣譜抗菌活性，對細(xì)菌與真菌均具有殺傷作用，但機(jī)理不同于抗生素，不易產(chǎn)生耐藥菌株。因此，在醫(yī)藥、食品、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域具有很高的應(yīng)用價值。利用基因工程技術(shù)培育轉(zhuǎn)防御素基因動物已經(jīng)成為人們研究的熱點(diǎn)。
　　 本研究采用RT-PC

2、R從荷斯坦奶牛氣管擴(kuò)增到114 bp的TAP基因，分析序列后根據(jù)大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)對密碼子的偏好性，人工合成牛TAP基因，構(gòu)建pET32a(+)-TAP重組質(zhì)粒，進(jìn)行原核表達(dá)，SDS-PAGE與Western-Blot檢測重組融合蛋白成功表達(dá)，蛋白分子量為24 KD，在大腸桿菌中可以高效表達(dá)，濾紙片法檢測表達(dá)目的蛋白具有明顯的抗金黃色葡萄球曲的活性，并研究組織分布，牛TAP基因在體內(nèi)多個組織中表達(dá)。同時構(gòu)建了真核表達(dá)載體FG9-TAP與p

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