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1、目的： Oct4是第一個被發(fā)現(xiàn)只在多能細胞中表達的轉(zhuǎn)錄因子，其功能被認為是控制細胞多能性的決定性因素。Oct4的這種作用機制目前并未明確，本研究將克隆小鼠Oct4基因，構(gòu)建其真核表達載體pEGFP-N2-Oct4，為今后能進一步研究小鼠Oct4基因的生物學功能奠定實驗基礎(chǔ)。 方法： 用TRIzol Reagent提取小鼠胚胎干細胞總RNA，并經(jīng)反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)獲得小鼠0ct4 DNA，將該基因連接克隆到含有增
2、強型綠色熒光蛋白報告基因的真核表達載體pEGFP—N2上，以構(gòu)建重組質(zhì)粒pEGFP—N2-OCT4。 結(jié)果： 獲取小鼠胚胎干細胞OCT4基因的全序列cDNA。將能發(fā)出綠色熒光的增強型綠色熒光蛋白報告基因融合OCT4基因構(gòu)建OCT4 cDNA真核表達質(zhì)粒，酶切后經(jīng)DNA電泳鑒定及DNA測序證實準確無誤。 結(jié)論： 成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒pEGFP-N2-OCT4，將增強型綠色熒光蛋白報告基因融合在OCT4基因的3
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