RNAi沉默子宮內膜癌RL95-2細胞COMT基因的實驗研究.pdf

1、中山大學碩士學位論文RNAi沉默子宮內膜癌RL952細胞COMT基因的實驗研究姓名：李揚志申請學位級別：碩士專業(yè)：婦產科學指導教師：謝梅青20090524◇中山失莘RNAi沉默了宮內膜癌RL952細胞coMT箍岡的實驗研究體外。但COMT基因與子宮內膜癌發(fā)病風險之間的關系目前尚未確定。我們旨在通過本研究采用RNAi方法阻斷COMT基因表達，探討COMT酶活性的改變及其對子宮內膜癌細胞增殖的影響。了解COMT基因與子宮內膜癌發(fā)生風險之間的

2、關系。材料與方法：選擇雌激素受體陽性的子宮內膜癌RL952細胞，針對目的基因COMT設計4對小干擾RNA：siCOMT96，siCOMT268，siCOMT303，siCOMT731，及陰性對照siRNA，通過脂質體將其轉染入RL952細胞中。實驗內容包括：1檢測RL952細胞中COMT基因表達。2檢測COMTsiRNA對RL952細胞的轉染率。3RealTimePCR、WesternBlot分別檢測COMT基因沉默后其mRNA和蛋白表

3、達水平的變化，篩選出沉默效果最好的RNA干擾序列。4液相色譜質譜(選擇離子監(jiān)測)法，MTT法分別檢測COMT基因沉默后RL952細胞中4OHE2水平和RL952細胞增殖活性的改變。結果：1RealTimePCR，Westernblot結果顯示RL952細胞中有COMT基因mRNA和蛋白表達。2熒光顯微鏡觀察結果顯示脂質體能有效地將COMTsiRNA轉染入RL952細胞中。其轉染率達80％以上。3RealTimePCR，Westernbl

4、ot結果顯示本實驗中設計的四對COMTsiRNA均能降低RL952細胞中COMTmRNA和蛋白表達。但程度不一，均以COMTsiRNA731的抑制效果最顯著。COMTmRNA相對表達量于轉染COMTsiRNA731后24h(02490017)，48h(0440064)較脂質體對照組24h(1)，48h(1)顯著降低，24h和48h分別下降766％和571％，差異有顯著性(P005)。COMT蛋白表達于轉染COMTsiRNA一731后48