外源性一氧化碳對體外培養(yǎng)星型膠質細胞血紅素加氧酶系統的影響.pdf

1、本文用外源性CO直接處理wistar大鼠大腦皮層星型膠質細胞，排除低氧的影響，觀察外源性CO對體外培養(yǎng)的wistar大鼠大腦皮層星型膠質細胞HO-CO系統的影響及其作用，從膠質細胞角度探索HO-CO系統在COP所致腦損傷中的變化及其作用，為研究COP及DEACMP的具體機制提供線索。 方法：進行wistar大鼠大腦皮層星型膠質細胞的體外分離、純化培養(yǎng)，用免疫細胞化學技術檢測膠質原纖維酸性蛋白(GFAP)表達。應用CCK-8試劑檢

2、測對照組、5μmol/L、10μmol/L、25μmol/L、50μmol/LZnpp-Ⅸ組體外培養(yǎng)的wistar大鼠大腦皮層星型膠質細胞的存活。實驗分組，①對照組：5﹪CO2+空氣；②CO處理組：1﹪CO+5﹪CO2+空氣；③CO+Znpp-Ⅸ處理組：10μmol/LZnpp-Ⅸ+1﹪CO+5﹪CO2+空氣。各組在37℃培養(yǎng)箱中孵育24小時，用免疫細胞化學技術檢測HO-1、HO-2蛋白的表達。雙波長分光光度計測定463nm和530nm

3、的吸光度值，計算膽紅素生成量代表HO活性。流式細胞儀檢測細胞早期凋亡。 結果：1.經三次傳代培養(yǎng)的細胞95﹪為GFAP陽性細胞即星型膠質細胞。2.450nm波長處吸光度值結果顯示25μmol/LZnpp-Ⅸ組(2.38±0.0368)和50μmol/LZnpp-Ⅸ組(2.33±0.0339)明顯低于對照組(2.44±0.0077)、5μmol/LZnpp-Ⅸ組(2.43±0.0021)和10μmol/LZnpp-Ⅸ組(2.43±

4、0.0157)；50μmol/LZnpp-Ⅸ組450nm波長處吸光度值低于25μmol/LZnpp-Ⅸ組；對照組、5μmol/LZnpp-Ⅸ組和10μmol/LZnpp-Ⅸ組450nm波長處吸光度值比較無明顯差異。3.對照組細胞HO-1染色為陰性，CO處理組與CO+Znpp-Ⅸ組細胞胞漿HO-1染色呈陽性；HO-1染色累積光密度值CO處理組(3497.91±180.49)及CO+Znpp-Ⅸ組(3435.25±92.31)顯著高于對照組

5、(143.53±20.77)，CO處理組與CO+Znpp-Ⅸ組比較HO-1累積光密度值差異無顯著性；對照組、CO處理組和CO+Znpp-Ⅸ組細胞胞漿HO-2染色均呈陽性；HO-2染色累積光密度值對照組(3735.65±133.17)、CO處理組(3724.89±97.19)及CO+Znpp-Ⅸ組(3719.08±85.38)間比較無顯著性差異。4.血紅素加氧酶活性結果顯示：CO處理組(80.05±6.78)和CO+Znpp-Ⅸ組(64.

6、11±4.35)均明顯高于對照組(44.28±3.80)，CO+Znpp-Ⅸ組血紅素加氧酶活性明顯低于CO處理組。5.早期凋亡細胞數百分比結果顯示：CO處理組(3.44±0.80)和CO+Znpp-Ⅸ組(8.06±0.99)均高于對照組(0.18±0.14)，CO+Znpp-Ⅸ組早期凋亡細胞數百分比高于CO處理組。 結論：1.正常情況下wistar大鼠大腦皮層星型膠質細胞只表達HO-2蛋白；CO誘導wistar大鼠大腦皮層星型膠