血紅素加氧酶-一氧化碳系統(tǒng)在骨髓增生異常綜合征中的表達及其造血調(diào)控作用.pdf

1、[目的]
　　 明確血紅素加氧酶/一氧化碳系統(tǒng)(HO-CO)在骨髓增生異常綜合征的表達水平及表達上調(diào)對骨髓增生異常綜合征的治療意義。
　　 [方法]
　　 選擇2009年9月～2012年3月在上東大學(xué)齊魯醫(yī)院就診的骨髓增生異常綜合征患者105例（其中難治性貧血患者27例、伴環(huán)形鐵粒幼細胞增多的難治性貧血患者8例、難治性血細胞減少伴多系增生異?；颊?6例、伴原始細胞增多的難治性貧血Ⅰ23例及伴原始細胞增多的難治性貧

2、血Ⅱ21例）作為病例對照組;以健康人22例作為對照組。
　　 提取其骨髓單個核細胞及骨髓基質(zhì)細胞并應(yīng)用相應(yīng)培養(yǎng)系統(tǒng)進行培養(yǎng)，應(yīng)用半定量-聚合酶鏈反應(yīng)測定骨髓單個核細胞對HO-1，HO-2的表達，應(yīng)用蛋白免疫印跡法測定ERK1/2，JNK1/2，p38MAPK蛋白及磷酸化ERK1/2，JNK1/2，p38MAPK蛋白的表達。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附檢測法測定骨髓基質(zhì)細胞培養(yǎng)液中GM-CSF，SCF及VEGF的含量。另外，應(yīng)用不同濃度的HO

3、-CO系統(tǒng)的活性上調(diào)藥物血紅素-左旋-賴氨酸鹽處理骨髓單個核細胞及骨髓基質(zhì)細胞的培養(yǎng)系統(tǒng)，然后用上述實驗方法檢測以上指標(biāo)的表達，以觀察HO-CO系統(tǒng)功能及表達的上調(diào)對MDS患者骨髓單個核細胞及骨髓基質(zhì)細胞的相應(yīng)指標(biāo)的影響。
　　 實驗結(jié)果數(shù)據(jù)采用SPSS統(tǒng)計軟件進行分析，實驗組與對照組比較采用t檢驗，實驗組間比較采用單因素方差分析和q檢驗，方差不齊時采用t’檢驗。
　　 [結(jié)果]
　　 1HO-1mRNA表達水平

4、
　　 MDS-RA、MDS-RARS、MDS-RCMD組HO-1mRNA均與正常對照組無明顯差別，MDS-RAEBⅠ、MDS-RAEBⅡ組HO-1mRNA表達水平明顯高于正常對照組。應(yīng)用不同濃度的HLL干預(yù)后，MDS-RA、MDS-RARS、MDS-RCMD、MDS-RAEBⅠ及MDS-RAEBⅡ組HO-1mRNA的表達水平明顯高于相應(yīng)對照組。
　　 2HO-2mRNA表達水平
　　 MDS-RA、MDS-RA

5、RS、MDS-RCMD、MDS-RAEBⅠ及MDS-RAEBⅡ各組HO-2mRNA的表達水平與正常對照組無明顯差異。應(yīng)用不同濃度的HLL干預(yù)后，MDS-RA、MDS-RARS、MDS-RCMD、MDS-RAEBⅠ及MDS-RAEBⅡ組HO-2mRNA的表達水平與相應(yīng)對照組無明顯差異。
　　 3ERK1/2蛋白及磷酸化ERK1/2蛋白的表達水平
　　 MDS-RA、MDS-RARS、MDS-RCMD組ERK1/2蛋白及磷酸

6、化ERK1/2蛋白的表達水平與正常對照組無明顯差異，MDS-RAEBⅠ、MDS-RAEBⅡ組ERK1/2蛋白及磷酸化ERK1/2蛋白的表達水平明顯高于正常對照組。
　　 應(yīng)用不同濃度的HLL干預(yù)后，MDS-RA、MDS-RARS、MDS-RCMD組在LL干預(yù)組、5nmol/4uLHLL干預(yù)組、50nmol/4uLHLL干預(yù)組及500nmol/4uLHLL干預(yù)組ERK1/2蛋白及磷酸化ERK1/2蛋白的表達水平與相應(yīng)對照組無明顯差

7、異。MDS-RAEBⅠ及MDS-RAEBⅡ組中，500nmol/4uLHLL溶液干預(yù)組ERK1/2蛋白及磷酸化ERK1/2蛋白的表達水平明顯低于相應(yīng)對照組。而LL干預(yù)組、5nmol/4uLHLL干預(yù)組、50nmol/4uLHLL干預(yù)組ERK1/2蛋白及磷酸化ERK1/2蛋白的表達水平與相應(yīng)對照組無明顯差異。
　　 4JNK1/2蛋白及磷酸化JNK1/2蛋白的表達水平
　　 MDS-RA、MDS-RARS、MDS-RCMD

8、組JNK1/2蛋白及磷酸化JNK1/2蛋白的表達水平明顯低于正常對照組，MDS-RAEBⅠ、MDS-RAEBⅡ組JNK1/2蛋白及磷酸化JNK1/2蛋白的表達水平與正常對照組無明顯差異。應(yīng)用不同濃度的HLL干預(yù)后，MDS-RA、MDS-RARS、MDS-RCMD組中，500nmol/4uLHLL溶液干預(yù)組JNK1/2蛋白及磷酸化JNK1/2蛋白的表達水平明顯高于相應(yīng)對照組，而LL干預(yù)組、5nmol/4uLHLL干預(yù)組、50nmol/4u

9、LHLL干預(yù)組JNK1/2蛋白及磷酸化JNK1/2蛋白的表達水平與相應(yīng)對照組無明顯差異。
　　 5p38MAPK蛋白及磷酸化p38MAPK蛋白表達水平
　　 MDS-RA、MDS-RARS、MDS-RCMD、MDS-RAEBⅠ及MDS-RAEBⅡ組p38MAPK蛋白及磷酸化p38MAPK蛋白均明顯高于正常對照組。應(yīng)用不同濃度的HLL干預(yù)后，MDS-RA、MDS-RARS、MDS-RCMD、MDS-RAEBⅠ及MDS-RA

10、EBⅡ組，500nmol/4uLHLL溶液干預(yù)組p38MAPK蛋白及磷酸化p38MAPK蛋白均明顯低于相應(yīng)對照組。而LL干預(yù)組、5nmol/4uLHLL干預(yù)組、50nmol/4uLHLL干預(yù)組p38MAPK蛋白及磷酸化p38MAPK2蛋白的表達水平與相應(yīng)對照組無明顯差異。
　　 6caspase-3活性的表達水平
　　 MDS-RA、MDS-RARS、MDS-RCMD、MDS-RAEBⅠ及MDS-RAEBⅡ組caspas

11、e-3活性的表達水平均明顯高于正常對照組。應(yīng)用不同濃度的HLL干預(yù)后，MDS-RA、MDS-RARS、MDS-RCMD、MDS-RAEBⅠ及MDS-RAEBⅡ組，500nmol/4uLHLL溶液干預(yù)組caspase-3活性的表達水平均明顯低于相應(yīng)對照組。而LL干預(yù)組、5nmol/4uLHLL干預(yù)組、50nmol/4uLHLL干預(yù)組caspase-3活性的表達水平與相應(yīng)對照組無明顯差異。
　　 7SCF表達水平
　　 MD

12、S-RA、MDS-RARS、MDS-RCMD、MDS-RAEBⅠ及MDS-RAEBⅡ組SCF分泌水平均明顯低于正常對照組。應(yīng)用不同濃度的HLL干預(yù)后，在MDS-RA、MDS-RARS、MDS-RCMD、MDS-RAEBⅠ及MDS-RAEBⅡ組中，500nmol/4uLHLL溶液干預(yù)組SCF分泌明顯高于相應(yīng)對照組。而LL干預(yù)組、5nmol/4uLHLL干預(yù)組、50nmol/4uLHLL干預(yù)組SCF分泌水平與相應(yīng)對照組無明顯差異。
　

13、　 8GM-CSF表達水平
　　 MDS-RA、MDS-RARS、MDS-RCMD、MDS-RAEBⅠ及MDS-RAEBⅡ組GM-CSF分泌水平均明顯低于正常對照組。應(yīng)用不同濃度的HLL干預(yù)后，在MDS-RA、MDS-RARS、MDS-RCMD、MDS-RAEBⅠ及MDS-RAEBⅡ組中，500nmol/4uLHLL溶液干預(yù)組SCF，GM-CSF分泌明顯高于相應(yīng)對照組。而LL干預(yù)組、5nmol/4uLHLL干預(yù)組、50nmol

14、/4uLHLL干預(yù)組GM-CSF的分泌與相應(yīng)對照組無明顯差異。
　　 9VEGF表達水平
　　 MDS-RA、MDS-RARS、MDS-RCMD組VEGF分泌水平與正常對照組無明顯差異，而MDS-RAEBⅠ、MDS-RAEBⅡ組VEGF分泌水平水平明顯高于相應(yīng)對照組。應(yīng)用不同濃度的HLL干預(yù)后，在MDS-RA、MDS-RARS、MDS-RCMD、MDS-RAEBⅠ及MDS-RAEBⅡ組中，500nmol/4uLHLL溶液

15、干預(yù)組VEGF分泌水平水平明顯低于相應(yīng)對照組。而LL干預(yù)組、5nmol/4uLHLL干預(yù)組、50nmol/4uLHLL干預(yù)組VEGF的分泌與相應(yīng)對照組無明顯差異。
　　 [結(jié)論]
　　 HO/CO系統(tǒng)可以通過影響多條信號通路，從而對造血調(diào)控起著重要的作用。其調(diào)控作用可以幫助MDS造血系統(tǒng)恢復(fù)正常有效的造血功能。HO/CO系統(tǒng)功能上調(diào)不僅僅對MDS患者骨髓中的正常造血細胞及造血基質(zhì)細胞具有一般的細胞保護作用，還可以針對MD

16、S骨髓正常造血細胞的過度凋亡、骨髓基質(zhì)中SCF，GM-CSF的分泌減少、VEGF分泌過多等特征性的病理機制對正常造血細胞及造血基質(zhì)細胞進行相應(yīng)的保護。
　　 血紅素-左旋-賴氨酸鹽可以上調(diào)HO/CO系統(tǒng)的功能。在體外細胞培養(yǎng)狀態(tài)下，500nmol/4uL的HLL溶液可以減少MDS各期患者骨髓早期造血細胞凋亡、增加骨髓基質(zhì)細胞對SCF，GM-CSF的分泌，并可以抑制MDS-RAEBⅠ及MDS-RAEBⅡ患者骨髓基質(zhì)中VEGF的過度