血紅素氧合酶-一氧化碳系統(tǒng)在妊娠期高血壓疾病患者發(fā)病機制中作用的研究.pdf

1、第一部分 血紅素氧合酶和內源性一氧化碳在妊娠期高血壓疾病患者胎盤組織中的作用 目的：通過妊娠期高血壓疾病孕婦胎盤組織中血紅素氧合酶的表達和內源性CO含量測定，探討血紅素氧合酶/一氧化碳系統(tǒng)在妊娠期高血壓疾病發(fā)病中的作用機制。 方法：逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測40例妊娠期高血壓疾病患者組(HDCP組)和15例正常晚孕婦女(對照組)胎盤組織中HO-1、HO-2mRNA的表達；HE染色觀察胎盤絨毛及血管病

2、變；免疫組化染色法檢測胎盤組織中HO-1、HO-2的定位和表達，采用高清晰度彩色醫(yī)學圖文分析系統(tǒng)對其定量分析；分光光度法測定胎盤組織中HO的活性；Westernblot檢測胎盤組織中HO-1、HO-2蛋白質的表達；雙波長定量測定法檢測胎盤組織勻漿上清液碳氧血紅蛋白(COHb)含量；硝酸還原酶法測定胎盤組織中NO代謝產物亞硝酸基/亞硝基(No2-/NO3-)。 結論：妊娠期高血壓疾病患者胎盤HO-1蛋白表達、轉錄和活性下降，內源性

3、CO生成減少，推測HO/CO系統(tǒng)可能參與了妊娠期高血壓疾病發(fā)病過程。HO/CO與NO/NOS系統(tǒng)二者在胎盤功能中可能有協(xié)同和互補作用。 第二部分 HO/CO系統(tǒng)在人臍靜脈內皮細胞中作用的實驗研究 目的：觀察氯血紅素(Hm)、二氯化鈷(CoCl2)誘發(fā)化學缺氧和低氧培養(yǎng)模擬妊娠期高血壓疾病體內內皮細胞缺氧環(huán)境對培養(yǎng)的人臍靜脈內皮細胞血紅素氧合酶表達和增殖，以及對細胞內游離鈣離子濃度[Ca2+]i的影響。 方

4、法：體外培養(yǎng)人臍靜脈內皮細胞，用氯血紅素和原卟啉鋅，以誘導和阻斷HO-1的表達。通過逆轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)和免疫細胞化學法檢測HO-1、HO-2mRNA和蛋白的定位及表達；酶聯(lián)免疫法檢測培養(yǎng)上清液中碳氧血紅蛋白(COHb)含量；MTT比色法和流式細胞技術檢測人臍靜脈內皮細胞增殖；RT-PCR觀測CoCl2與血紅素氧合酶表達間的量-效和時-效關系；熒光分光光度法觀察常氧、低氧條件下，鈣熒光探針(Fura-2/AM)負載培養(yǎng)的

5、人臍靜脈內皮細胞[Ca2+]i的變化。 結論：Hm、CoCl2、缺氧培養(yǎng)誘導慢性缺氧促進人臍靜脈內皮細胞增殖并上調血紅素氧合酶-1和內源性CO，是保護內皮損傷的分子學基礎。缺氧細胞內游離鈣離子水平升高，可能與內源性CO共同參與血管張力的調節(jié)。HO/CO系統(tǒng)可能在妊娠期高血壓疾病等心血管病的發(fā)生和發(fā)展中起重要作用。 第三部分 HO/CO系統(tǒng)對人臍靜脈內皮細胞抗氧化應激損傷保護作用的實驗研究 目的：采用過氧化

6、氫制作人臍靜脈內皮細胞體外氧化應激損傷的細胞模型，通過缺氧預處理和氯血紅素預處理，觀察HO/CO系統(tǒng)對人臍靜脈內皮細胞氧化損傷的影響。 方法：觀察各組細胞在光鏡、電鏡下形態(tài)和超微結構的改變；用臺盼藍排斥實驗、MTT法檢測了各組細胞活力；LDH釋放量評價細胞損傷程度；并通過逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)觀察其與血紅素氧合酶表達間的關系。 結論：體外采用500umol/L過氧化氫為血管內皮細胞氧化損傷的最適宜濃度。缺氧

7、、10umol/L氯血紅素預處理對人臍靜脈內皮細胞氧化應激損傷有明顯的保護作用。 第四部分 MAPK信號傳導系統(tǒng)在妊娠期高血壓疾病中的調控及其與HO/CO系統(tǒng)的相互關系初探 目的：ERK1/ERK2MAPKs信號途徑對缺氧和酸性成纖維細胞因子(aFGF)誘導的人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)以及在妊娠期高血壓疾病HO/CO系統(tǒng)中的調控作用。 方法：aFGF或缺氧刺激人臍靜脈內皮細胞，采用RT-PCR檢測胎盤

8、組織和人臍靜脈內皮細胞HO-1mRNA表達水平；Westernblot測定胎盤組織和人臍靜脈內皮細胞ERK1/ERK1磷酸化水平；培養(yǎng)上清液和胎盤組織勻漿上清液中碳氧血紅蛋白(COHb)測定；MTT比色法觀察PD98059對細胞增殖的抑制作用。 結論：缺氧通過激活ERK1/ERK2信號傳導途徑，誘導HUVECHO/CO系統(tǒng)的表達。ERK信號途徑參與了aFGF介導的HUVEC增殖。表明ERK1/ERK2信號通路參與了妊娠期高血壓疾