丙酮酸乙脂對梗阻性黃疸大鼠肝細(xì)胞保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　 梗阻性黃疸(Obstructive jaundice，OJ)是肝膽外科常見的病理狀態(tài)，它可導(dǎo)致機(jī)體各系統(tǒng)靶器官的損害以及相應(yīng)的病理生理改變，其中最主要的是肝細(xì)胞損傷，也是其它并發(fā)癥的重要誘因。OJ時肝臟的損害機(jī)制復(fù)雜，其中一個重要的方面就是內(nèi)毒素的產(chǎn)生，內(nèi)毒素達(dá)到一定的量時就會產(chǎn)生內(nèi)毒素血癥，給機(jī)體帶來嚴(yán)重的危害，甚至發(fā)生內(nèi)毒素性休克和多器官功能障礙綜合癥(MODS)。目前對OJ時內(nèi)毒素血癥引起肝細(xì)胞損傷缺乏有效的

2、治療手段。本研究利用S-D大鼠OJ模型對大鼠血清內(nèi)毒素的含量、肝細(xì)胞的病理變化、肝功能的變化以及丙酮酸乙脂(Ethyl pyruvate，EP)對大鼠進(jìn)行干預(yù)后各指標(biāo)的變化進(jìn)行研究。
　　 方法：
　　 1.動物和分組：將30只S-D雌性大鼠，體重250g～300g，隨機(jī)分為三組，每組10只：(1)假手術(shù)組(SO組)，(2)陽性對照組：膽總管結(jié)扎組(BDL組)，(3)實(shí)驗(yàn)組：膽總管結(jié)扎+丙酮酸乙脂組40mg/kg(BDL

3、+EP組)。
　　 2.動物模型制作：(1)SO組開腹后單純游離膽管不予結(jié)扎；(2)BDL組開腹后游離出膽總管，并結(jié)扎及離斷膽總管，術(shù)后6小時開始進(jìn)食；(3)BDL+EP組開腹后游離出膽總管，并結(jié)扎及離斷膽總管，術(shù)后6小時開始進(jìn)食，術(shù)后第8日按40mg/kg劑量腹腔注射丙酮酸乙脂林格氏液(REPS)，每天一次，連續(xù)腹腔注射7天。
　　 3.檢測方法和觀察內(nèi)容：大鼠術(shù)后第15天從每只大鼠下腔靜脈抽血，并迅速切取左中葉新鮮肝

4、組織，制備標(biāo)本并保存。(1)肝組織蘇木素-伊紅染色觀察病理變化。(2)血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)，用自動生化儀測量。(3)檢測大鼠血清內(nèi)毒素的含量，使用顯色基質(zhì)定量鱟試劑盒(終點(diǎn)顯色法)配合分光光度計(jì)。(4)觀察各組大鼠的皮膚、尿液及肝臟顏色的變化。
　　 4.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有檢測結(jié)果均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-X±S)表示，用SPSS17.0進(jìn)行單因素方差分析t檢驗(yàn)，P<0.05即認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.01有顯著性差異。
　　

5、 結(jié)果：
　　 1.大鼠的一般情況：
　　 (1)假手術(shù)組(SO組)：大鼠皮膚、尿液顏色無改變，糞便顏色正常，對疼痛刺激反應(yīng)靈敏。
　　 (2)陽性對照組(BDL組)：皮膚、尿液顏色呈黃色，糞便顏色部分呈陶土樣，對疼痛刺激反應(yīng)遲鈍。
　　 (3)實(shí)驗(yàn)組(BDL+EP組)：皮膚、尿液顏色呈黃色，糞便顏色部分呈陶土樣，對疼痛刺激反應(yīng)遲鈍。腹腔注射EP后，與BDL組比較，皮膚、尿液黃色較淡，糞便顏色無明顯變化。

6、
　　 2.肉眼觀察及光鏡下觀察HE染色結(jié)果：
　　 (1)SO組：開腹可見有少量腹水，呈水樣顏色，肝臟顏色鮮紅，表面有光澤，質(zhì)地柔軟，膽管未見擴(kuò)張；肝細(xì)胞無明顯腫脹、壞死，肝細(xì)胞索排列整齊。
　　 (2)BDL組：有少量黃色腹水，肝臟顏色淡黃，呈不同程度的淤膽狀，表面無光澤，近肝側(cè)膽管呈囊樣擴(kuò)張充滿膽汁，呈直徑約0.3～0.6cm不等的擴(kuò)張；肝小葉內(nèi)可見多種形態(tài)的壞死灶，周圍大量炎性細(xì)胞浸潤，纖維組織及小膽管廣

7、泛增生，部分肝組織增生更明顯，結(jié)構(gòu)紊亂呈肝硬化特征。
　　 (3)BDL+EP組：有少量腹水，顏色呈淡黃色，肝臟顏色淡黃色，近肝側(cè)膽管呈囊樣擴(kuò)張充滿膽汁，呈直徑約0.3～0.4cm不等的擴(kuò)張；部分僅見肝細(xì)胞出現(xiàn)點(diǎn)狀壞死和少量纖維組織增生，部分肝組織增生、匯管區(qū)結(jié)構(gòu)可分辨，與BDL組比較肝臟病理損傷輕。
　　 3.各組大鼠血清ALT及內(nèi)毒素的數(shù)值比較：BDL組及BDL+EP組術(shù)后第15天檢測內(nèi)毒素及ALT數(shù)值均明顯比SO組