氫基胍對梗阻性黃疸大鼠肝細胞保護作用的實驗研究.pdf

1、目的:
　　 梗阻性黃疸(obstructive jaundice，OJ)是外科臨床常見的病理狀態(tài)，它可導致機體各系統靶器官的損害以及相應的病理生理改變，其中最主要的是肝細胞損傷，也是其它并發(fā)癥的重要誘因。OJ時肝臟的損害機制復雜，其中內毒素的產生導致腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factorα，TNF-α)、一氧化氮(nitric oxide，NO)等炎癥因子損傷是一個重要的方面。有研究表明OJ時大量產生的NO

2、也參與對肝細胞的損傷。目前NO對OJ時肝細胞損傷影響方面的研究報道不多。本研究利用大鼠OJ模型對大鼠血清和肝組織NO含量、肝細胞的氧化損傷、肝細胞病理變化、肝細胞的凋亡以及氨基胍(aminoguanidine，AG)對大鼠進行干預后各指標的變化進行了研究，并進一步從NO對OJ肝細胞損傷機制方面作了探討。
　　 方法:
　　 1.動物和分組：將48只雄性S-D大鼠，體重250g-300g，隨機分為6組：①假手術組(S組)；

3、②膽管結扎組(BDL)；③陽性對照組：膽管結扎+古拉定組125mg/Kg(BDL+GLD)；④膽管結扎+低劑量AG組25mg/Kg(BDL+LAG)；。⑤膽管結扎+中劑量AG組50mg/Kg(BDL+MAG)；⑥膽管結扎+高劑量組100mg/Kg(BDL+HAG)
　　 2.動物模型制作：①組開腹后單純游離膽管不予結扎，②、③、④、⑤、⑥組行膽總管結扎術，并離斷膽管，術后6小時開始進食，④、⑤、⑥各組術后第3日按不同劑量腹腔注射

4、氨基胍，分別為OL25mg/Kg、OM50mg/Kg、OH100mg/Kg。③組術后第3日腹腔注射古拉定(125mg/Kg)。
　　 3.檢測方法和觀測指標：①血液中一氧化氮(NO)、肝組織中NO、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量測定按照試劑盒說明書進行；②肝組織蘇木素-伊紅染色觀察病理變化；③通過免疫組織化學染色觀察肝組織表達的誘導型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase，i

5、NOS)；④行脫氧核苷酸末端轉移酶介導的缺口末端標記(Terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTPnick-end-labeling，TUNEL)染色檢測肝細胞凋亡數。
　　 4.所有結果采用均數±標準差(()±s)表示，用SPSS10.0進行單因素方差分析t檢驗，P<0.05即認為有統計學意義，P<0.01有顯著性差異。。
　　 結果：
　　 1.假手術

6、組大鼠行動敏捷，對疼痛刺激反應靈敏，皮膚、尿液顏色無改變；腹腔無腹水，肝臟顏色鮮紅，表面有光澤，質地柔軟，膽管未見擴張；光鏡下見：肝細胞無腫脹、壞死，肝細胞索排列整齊。而②、③、④、⑤、⑥各組大鼠均有不同程度的行動遲緩、對疼痛刺激反應遲鈍，皮膚、尿液呈黃色，腹腔有少量淡黃色腹水；肝臟顏色淡黃，呈程度不等的瘀膽狀，表面無光澤，結扎處近肝側膽總管呈直徑約0.3cm-0.6cm不等的擴張；細胞呈不同程度腫脹、脂肪變性，肝內小膽管擴張，少量纖維

7、組織增生。
　　 2.②組、③組、④組、⑤組、⑥組血清和肝組織中NO含量、肝組織MDA值以及肝細胞凋亡指數均明顯高于假手術組(P<0.01)，而各組SOD值則明顯低于假手術組(P<0.01)。與②組相比，④組、⑤組、⑥組在給予AG后血清和肝組織中NO含量有不同程度下降(P<0.01)，血清MDA值和肝細胞凋亡指數下降(P<0.01)，SOD值升高(P<0.01)。與②組比較，③組血清和肝組織中NO含量無明顯變化(P>0.05)，

8、而血清MDA值和肝細胞凋亡指數降低(P<0.01)，SOD值升高(P<0.01)。
　　 3.免疫組織化學法檢測肝組織iNOS蛋白陽性細胞為呈棕黃色顆粒的陽性反應產物，假手術組未見陽性細胞，iNOS表達(-)，而②組、③組、④組、⑤組、⑥組肝組織出現明確的陽性細胞，iNOS表達(+)，提示梗阻性黃疸肝細胞有iNOS蛋白表達。
　　 結論：
　　 1.梗阻性黃疸時，大鼠肝組織有iNOS表達并催化產生大量NO，導致血