凝血酶抑制劑阿加曲班對實(shí)驗(yàn)性大鼠腦出血灶周組織作用的研究.pdf

1、目的：探討靜脈應(yīng)用凝血酶抑制劑阿加曲班對實(shí)驗(yàn)性大鼠ICH后灶周組織的影響，以及探討凝血酶對大鼠實(shí)驗(yàn)性ICH灶周組織的可能損傷機(jī)制。 方法：采用立體定向技術(shù)將自體動脈血注入大鼠尾狀核區(qū)制備大鼠大腦內(nèi)出血模型。將雄性SD大鼠隨機(jī)分為三組：假手術(shù)組、對照組及阿加曲班組。假手術(shù)組：僅立體定向下向右尾狀核區(qū)插針而不注射動脈血，同時由尾靜脈每日一次注射生理鹽水(1mg/kg)；對照組：向腦內(nèi)右側(cè)尾狀核區(qū)注射60μl自體血，同時由尾靜脈每日一

2、次注射生理鹽水(1mg/kg)；阿加曲班用藥組：向腦內(nèi)右側(cè)尾狀核區(qū)注射60μl自體血同時由尾靜脈每日一次阿加曲班注射(1mg/kg)。采用免疫組化、RT-PCR及蛋白印跡法分別于1d、3d和5d時間點(diǎn)聯(lián)合檢測灶周腦組織中AQP4、MMP-9及NF-κB表達(dá)情況；同時評價應(yīng)用阿加曲班在ICH后6h、12h、1d、3d、5d、7d時間點(diǎn)時大鼠神經(jīng)行為缺損評分、血腦屏障通透性和腦水含量等變化情況。 結(jié)果：(1)阿加曲班組各時間點(diǎn)神經(jīng)功

3、能評分均高于對照組各時間點(diǎn)的評分，在第7d時接近正常評分；在第12h、1d及3d時，阿加曲班組與對照組神經(jīng)功能評分具有明顯差異；而在大鼠ICH后第6h、5d及7dEl寸，對照組及阿加曲班組之間神經(jīng)功能評分無明顯差異。(2)對照組較假手術(shù)組腦水含量明顯升高(p<0.01)；對照組腦含水量從6h即開始增加，3d達(dá)到高峰，之后緩慢下降，7d仍高于正常；阿加曲班組各時間點(diǎn)腦水含量較對照組各時間點(diǎn)腦水含量明顯減少(p<0.05)。(3)大鼠ICH

4、后各時間點(diǎn)腦組織EB含量增加，出血后6h開始升高，第3d最高，5～7d逐漸降低；阿加曲班組各時間點(diǎn)EB含量明顯低于對照組(p<0.05)。(4)阿加曲班組AQP4陽性細(xì)胞表達(dá)自12h后各時間點(diǎn)均較同一時間點(diǎn)對照組減少(p<0.05)；AQP4mRNA和蛋白表達(dá)在對照組三個時間點(diǎn)均升高，第3d達(dá)高峰值（p<0.05)；阿加曲班組在第1d始AQP4mRNA表達(dá)減少，而AQP4蛋白在第3d才顯著減少，共同持續(xù)到第5d。(5)對照組灶周組織MM

5、P-9陽性細(xì)胞普遍表達(dá)，阿加曲班組MMP-9陽性細(xì)胞表達(dá)各時間點(diǎn)均較同一時間點(diǎn)對照組減少(p<0.05)，MMP-9mRNA和蛋白表達(dá)在對照組三個時間點(diǎn)均升高，第3d達(dá)高峰值(p<0.05)；阿加曲班組在第1d(0.56±0.03)始MMP-9mRNA表達(dá)即減少，持續(xù)到第5d(0.6±0.03)，而MMP-9蛋白在第3d(0.60±0.04)才顯著減少，持續(xù)到第5d(0.41±0.05)(p<0.05)。(6)對照組NF-κBN性細(xì)胞于

6、6h即有明顯增多，1d達(dá)高峰(p<0.05)，阿加曲班治療組NF-κB陽性細(xì)胞數(shù)少于對照組（p<0.05)；對照組各時間點(diǎn)ICH的灶周組織NF-κBmRNA和蛋白表達(dá)量均高于假手術(shù)組(p<0.05)；阿加曲班組在第1d(1.0±0.05)始NF-κBmRNA表達(dá)即減少，持續(xù)到第5d(0.64±0.04)；阿加曲班組在第3d(0.59±0.049)NF-κB蛋白印跡表達(dá)量減少，持續(xù)到第5d(0.50±0.05)(p<0.05)。

7、結(jié)論：(1)阿加曲班可有效減低實(shí)驗(yàn)性大鼠ICH后灶周腦水腫、降低BBB通透性，對實(shí)驗(yàn)性大鼠ICH后的神經(jīng)功能恢復(fù)有一定程度的促進(jìn)作用；(2)大鼠ICH后AQP4、MMP-9與NF-κBmRNA和蛋白呈時間依賴性動態(tài)上調(diào)表達(dá)變化，與ICH后腦水腫有密切的關(guān)系；(3)阿加曲班可有效抑制ICH后AQP4、NF-κB和MMP-9mRNA及蛋白的表達(dá)作用，可能通過下調(diào)AQP4、MMP-9與NF-κB表達(dá)來促進(jìn)腦水腫的清除，這可能是阿加曲班減輕腦出