骨髓來源細胞移植對糖尿病小鼠血糖的影響及作用機制的研究.pdf

1、糖尿病是一種常見的內(nèi)分泌疾病，發(fā)病率在全世界范圍內(nèi)逐年上升。目前糖尿病的主要治療方法有口服藥物、注射胰島素、胰腺移植以及胰島移植等，然而都有各自的缺點。研究表明，骨髓來源細胞包含多種干細胞，具有取材方便、分離培養(yǎng)容易等優(yōu)點。骨髓來源細胞移植能改善組織損傷動物模型的功能，臨床上已經(jīng)用于治療心血管疾病并取得了良好的效果。本研究旨在闡明骨髓來源細胞移植對糖尿病小鼠血糖的影響及作用機制，為糖尿病提供更理想的治療方法。為此，首先采用小劑量多次腹腔

2、內(nèi)注射鏈脲霉菌素(STZ)的方法制作糖尿病小鼠模型，然后用密度梯度離心法分離骨髓細胞，再經(jīng)尾靜脈移植至糖尿病小鼠體內(nèi)。移植后每周固定時間測量小鼠血糖，移植后第4周發(fā)現(xiàn)接受骨髓來源細胞移植的糖尿病小鼠血糖明顯下降，降幅平均值約為7mmol/L，并維持穩(wěn)定至移植后第6周。移植后第6周處死骨髓移植組小鼠，觀察其胰腺組織學變化。胰腺組織HE染色發(fā)現(xiàn)接受骨髓來源細胞移植的糖尿病小鼠胰島形態(tài)接近正常胰島，數(shù)目明顯增多，并發(fā)現(xiàn)新生的胰島。這些新生的胰

3、島大多出現(xiàn)在胰腺導(dǎo)管周圍。胰島素免疫熒光發(fā)現(xiàn)較多孤立的胰島素陽性細胞以及由兩三個胰島素陽性細胞組成的胰島。通過胰島素和胰高血糖素免疫熒光雙標，在部分胰島內(nèi)和胰島外發(fā)現(xiàn)了胰島素和胰高血糖素雙陽性的細胞。目前的研究表明這種細胞只在干細胞向胰島細胞分化的過程中出現(xiàn)。因此，認為成體胰腺組織中存在一類具有干細胞特性的細胞，新生的胰島β細胞是由這類胰腺干細胞轉(zhuǎn)分化而來：胰島內(nèi)胰島素陽性的細胞是由胰島內(nèi)分泌前體細胞分化而來或α細胞轉(zhuǎn)分化而來，而胰島外

4、胰島素陽性的細胞由胰島外具有干細胞特性的內(nèi)分泌前體細胞(可能是胰腺外分泌細胞、胰腺導(dǎo)管細胞)分化而來，再增殖為新胰島。胰島素和胰高血糖素雙陽性細胞的出現(xiàn)也表明α細胞和β細胞來源于共同的內(nèi)分泌前體細胞。 研究表明骨髓來源細胞具有多向分化的潛能，為了進一步闡明糖尿病小鼠血糖的降低是否由于移植的骨髓來源細胞在糖尿病小鼠體內(nèi)轉(zhuǎn)分化為胰島細胞引起。將綠色熒光蛋白(GFP)轉(zhuǎn)基因小鼠骨髓來源細胞移植至糖尿病小鼠體內(nèi)，血糖出現(xiàn)明顯下降后(約移

5、植后4周)處死小鼠，觀察GFP陽性細胞的相關(guān)表型。Nkx6.1、Nkx2.2、Pax4、Pax6、Ngn3、NeuroD、PDX—l是胰島細胞不同發(fā)育階段的標記物。Nestin是一種中間絲蛋白，在神經(jīng)干細胞和胰腺干細胞中都表達。選擇Insulin、GlLmagon、Nestin、Nkx6.1、Nkx2.2、Pax4、Pax6、Ngn3、NetlroD、PDX-1分別和GFP進行免疫熒光雙標，結(jié)果在接受骨髓細胞移植的糖尿病小鼠胰腺中沒有發(fā)