沙利度胺聯(lián)用5-氟尿嘧啶對(duì)實(shí)驗(yàn)性肝癌的治療作用及部分機(jī)制研究.pdf

1、肝癌在我國(guó)發(fā)生率較高，是一種嚴(yán)重威脅我國(guó)人民生命健康的疾病。對(duì)于無(wú)法手術(shù)切除的或肝癌手術(shù)切除后預(yù)防及復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移性肝癌的治療，化療仍然是主要治療手段。 沙利度胺(thalidomide，THD)是一種谷氨酸衍生物，最初用于治療妊娠嘔吐，但是因?yàn)槠渲禄饔枚?0世紀(jì)60年代初撤出市場(chǎng)。后來(lái)發(fā)現(xiàn)其對(duì)一些免疫性疾病有效。近期研究發(fā)現(xiàn)，THD具有抗腫瘤潛能。它通過(guò)抑制新血管產(chǎn)生，調(diào)節(jié)免疫功能，促進(jìn)凋亡等發(fā)揮抗肝癌作用。 5.氟尿嘧

2、啶(5-fluorouracil，5-Fu)屬經(jīng)典的抗代謝類腫瘤化療藥，廣泛用于惡性腫瘤的治療，目前仍然是治療原發(fā)性肝癌的主要藥物之一。但其存在著毒副作用大，半衰期短，久用易耐藥等缺點(diǎn)。 本文以體內(nèi)、外實(shí)驗(yàn)相結(jié)合，對(duì)沙利度胺聯(lián)用5-氟尿嘧啶抗肝癌作用及其機(jī)制展開(kāi)探討?，F(xiàn)分述如下： 一、沙利度胺聯(lián)用5-氟尿嘧啶體外抗肝癌作用采用MTT法檢測(cè)沙利度胺聯(lián)用5-氟尿嘧啶對(duì)體外培養(yǎng)的肝癌細(xì)胞株增殖抑制作用。沙利度胺聯(lián)用5-氟尿嘧啶

3、在(6.25+3.125)-(100+50)μmol·L-1劑量下對(duì)體外培養(yǎng)的鼠源性HepA肝癌細(xì)胞株和人源性HepG2肝癌細(xì)胞株均有抑制作用。藥物濃度越高，抑制作用越強(qiáng)，有明顯的量效關(guān)系。對(duì)不同的細(xì)胞系抑制作用不同，其IC50值分別為：[28.9μmol·L-1(THD)、14.4μmol·L-1(5-Fu)]，[33.9μmol·L-1(THD)和17.0μmol·L-1(5-Fu)]，均強(qiáng)于單用沙利度胺(73.2，78.6μmol

4、·L-1)和單用5-Fu(29.2，34.9μmol·L-1)，且兩藥具有協(xié)同作用。以沙利度胺聯(lián)用5-氟尿嘧啶(50+25)μmol·L-1分別作用于HepA細(xì)胞和HepG2細(xì)胞，于12，24，36，48h觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，發(fā)現(xiàn)沙利度胺聯(lián)用5-氟尿嘧啶對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制有明顯的時(shí)間效應(yīng)關(guān)系，作用時(shí)間越長(zhǎng)，抑制作用越強(qiáng)。24-48h，沙利度胺聯(lián)用5-氟尿嘧啶抑制作用明顯強(qiáng)于單用相同劑量的沙利度胺或5-Fu。二、沙利度胺聯(lián)用5-氟尿嘧啶體內(nèi)抗

5、肝癌作用沙利度胺聯(lián)用5-氟尿嘧啶連續(xù)給藥13天，對(duì)HepA肝癌模型小鼠腫瘤的生長(zhǎng)有明顯的抑制作用，沙利度胺聯(lián)用5-氟尿嘧啶[(20+20)，(40+20)，(80+20)mg·kg-1×13d]的抑瘤率分別為38.2，56.2，66.1％，其中沙利度胺聯(lián)用5-氟尿嘧啶[(40+20)mg·kg-1×13d]對(duì)腫瘤的抑制作用強(qiáng)于單用相同劑量的沙利度胺或5-Fu；另外，沙利度胺聯(lián)用5-氟尿嘧啶能明顯延長(zhǎng)HepA肝癌模型小鼠的存活時(shí)間，沙利度

6、胺聯(lián)用5-氟尿嘧啶[(20+20)，(40+20)，(80+20)mg·kg-1]的存活延長(zhǎng)率分別為35.5，80.8，129.6％。 三、沙利度胺聯(lián)用5-氟尿嘧啶體內(nèi)抗肝癌的毒副作用沙利度胺聯(lián)用5-Fu[(20+20)，(40+20)，(80+20)mg·kg-1×13d]明顯增加HepA的肝癌小鼠的體重增長(zhǎng)，且體重增長(zhǎng)作用明顯強(qiáng)于5-Fu 20 mg·kg-1組。沙利度胺聯(lián)用5-Fu(80+20)mg·kg-1組能明顯改善5

7、-Fu 20 mg·kg-1組白細(xì)胞計(jì)數(shù)的降低。另外，沙利度胺聯(lián)用5-Fu(40+20)mg·kg-1，(80+20)mg·kg-1明顯增加HepA肝癌小鼠的脾臟指數(shù)，且增長(zhǎng)作用明顯強(qiáng)于5-Fu 20 mg·kg-1組。 四、沙利度胺聯(lián)用5-氟尿嘧啶抗肝癌作用的機(jī)制研究沙利度胺聯(lián)用5-氟尿嘧啶(25+12.5)μmol·L-1，(100+50)μmol·L-1體外能明顯抑制HepG2細(xì)胞胸苷酸合成酶(TS)表達(dá)，且沙利度胺聯(lián)用5

8、-氟尿嘧啶(100+50)μmol·L-1抑制作用強(qiáng)于相同濃度的單用5-Fu。 經(jīng)沙利度胺聯(lián)用5-氟尿嘧啶處理后的HepG2細(xì)胞，電子顯微鏡下可見(jiàn)典型的腫瘤細(xì)胞凋亡改變?？梢?jiàn)體積縮小的凋亡細(xì)胞，染色質(zhì)濃縮致密，并沿核膜分布形成新月?tīng)铙w，凋亡晚期細(xì)胞，可見(jiàn)細(xì)胞分解為膜包裹的凋亡小體。進(jìn)行DNA標(biāo)記，流式細(xì)胞儀分析凋亡改變。沙利度胺聯(lián)用5-氟尿嘧啶在(6.25+3.125)-(100+50)μml·L-1濃度作用HepG2細(xì)胞48h

9、，凋亡率由10.9％上升到37.8％％，呈現(xiàn)明顯的濃度依賴關(guān)系，且濃度為(100+50)pmol·L.'凋亡率強(qiáng)于單用相同劑量的5-Fu。沙利度胺聯(lián)用5-Fu(40+20)，(80+20)mg·kg-1組明顯增加HepA肝癌小鼠ConA、LPS誘導(dǎo)的脾淋巴細(xì)胞增殖，且明顯強(qiáng)于單用5-Fu 20 mg·kg-1組。另外，沙利度胺聯(lián)用5-Fu(40+20)，(80+20)mg·kg-1明顯增加HepA肝癌小鼠IL-2的產(chǎn)生和NK細(xì)胞活性，抑