AngⅡ和TGF-β-,1-交叉對(duì)話介導(dǎo)心肌重構(gòu)信號(hào)通路的研究.pdf

1、第一部分
　　目的：探討炎癥因子對(duì)心肌梗死(MI)后大鼠心室重構(gòu)的影響及與相互關(guān)系。
　　 方法：制作心肌梗死(MI)模型將雄性SD大鼠120 只，隨機(jī)分MI組(75 只)和假手術(shù)組(45 只)，在處死動(dòng)物之前檢測(cè)血流動(dòng)力學(xué)和組織形態(tài)學(xué)如左室重量指數(shù)(左室與體重比)和心梗面積大小。心梗動(dòng)物行冠脈前降支結(jié)扎，假手術(shù)組動(dòng)物只穿線但不結(jié)扎。于手術(shù)后3d、1w、4w、24w分別觀察不同時(shí)間點(diǎn)的胚胎基因(β肌球蛋白重鏈)，Ⅰ、Ⅲ型

2、膠原和炎癥因子的mRNA 水平和同期的膠原分子在心肌的分布表達(dá)變化。
　　 結(jié)果：心肌梗死后第3天胚胎基因β-MHC、膠原(Ⅰ，Ⅲ型膠原)、細(xì)胞因子(TGF-β1、TNF-α)都上升，一直持續(xù)到第4周。梗死區(qū)Ⅰ，Ⅲ型膠原在第4w 仍然比非梗死區(qū)為高，即使在第24w 非梗死區(qū)的膠原水平仍然高于假手術(shù)組。TGF-β1、TNF-α在第1w達(dá)到高峰后逐漸下降到第24w 時(shí)非梗死區(qū)比梗死區(qū)升高，與假手術(shù)組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，

3、細(xì)胞因子TGF-β1、TNF-α通過調(diào)節(jié)收縮蛋白基因和胚胎基因及膠原從而扮演重要角色。相關(guān)性分析提示梗死區(qū)TGF-β1、TNF-α與Ⅰ，Ⅲ型膠原、β-MHC；非梗死區(qū)TGF-β1、TNF-α與Ⅰ，Ⅲ型膠原存在相關(guān)。
　　 結(jié)論：炎癥因子參與心室重塑的病理生理過程，干預(yù)細(xì)胞因子可能作為早期防治心室重塑的手段。
　　 第二部分
　　 目的：通過研究新生大鼠體外培養(yǎng)的心肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制交叉對(duì)話探討心室重

4、構(gòu)機(jī)制。
　　 方法：用AngⅡ和TGF-β1 及其相應(yīng)的阻斷劑Valsartan和Staurosporine 刺激體外培養(yǎng)新生大鼠心肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞觀察心室重構(gòu)。蛋白含量，搏動(dòng)頻率，細(xì)胞表面積評(píng)價(jià)心肌細(xì)胞肥大。流式細(xì)胞儀評(píng)價(jià)心肌細(xì)胞凋亡。MTT 評(píng)判心肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞增殖。RT-PCR檢測(cè)ANF，β-MHC，Bax，Ⅰ、Ⅲ型膠原,MMP2，Smad3 等mRNA 水平。Western blotting檢測(cè)磷酸化Stat1,

5、Stat1,磷酸化Stat3,Stat3,Smad2/3。明膠酶譜法檢測(cè)MMP 活性。放免法檢測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞上清的AngⅡ。ELISA 法檢測(cè)培養(yǎng)上清的TGF-β1。
　　 結(jié)果：AngⅡ(10-7mol/L)或者TGF-β1(3ng/ml)刺激心肌細(xì)胞的蛋白含量，搏動(dòng)頻率，細(xì)胞面積呈現(xiàn)時(shí)間依賴方式的增加。MTT和流式細(xì)胞儀檢測(cè)促凋亡和促存活揭示AngⅡ和TGF-β1 刺激心肌細(xì)胞呈現(xiàn)濃度和時(shí)間依賴性。MTT檢測(cè)成纖維細(xì)胞增殖也提示

6、AngⅡ和TGF-β1 刺激成纖維細(xì)胞呈現(xiàn)濃度和時(shí)間依賴性變化。與對(duì)照組相比AngⅡ和TGF-β1 刺激明顯增加ANF，β-MHC，Bax，Ⅰ、Ⅲ型膠原,MMP2,Smad3的mRNA 水平。AngⅡ和TGF-β1 刺激磷酸化Stat1/Stat1，磷酸化Stat3/Stat3，Smad2/3的增加可以被相應(yīng)的阻斷劑呈現(xiàn)時(shí)間依賴式的方式逆轉(zhuǎn)。明膠酶譜法檢測(cè)AngⅡ或TGF-β1 刺激培養(yǎng)成纖維細(xì)胞的上清的MMP 活性呈現(xiàn)時(shí)間依賴性。預(yù)先

7、給予AT1 阻斷劑Valsartan 可以逆轉(zhuǎn)AngⅡ刺激培養(yǎng)心肌細(xì)胞和心臟成纖維細(xì)胞的分泌的TGF-β1 增加。PKC 抑制劑Staurosporine 明顯抑制TGF-β1 促進(jìn)心肌細(xì)胞和心臟成纖維細(xì)胞分泌AngⅡ。
　　 結(jié)論：AngⅡ和TGF-β1 通過Stat1,Stat3,和Samd2/3 信號(hào)途徑介導(dǎo)心肌細(xì)胞肥大，凋亡，增殖。心肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的交叉對(duì)話可以對(duì)于心室重構(gòu)提供有效干預(yù)方法。
　　 第三部分<

8、br>　　 目的：通過研究纈沙坦對(duì)急性心肌梗死病人的細(xì)胞因子和RAS 影響探討干預(yù)心室重構(gòu)的可能機(jī)制。
　　 方法：應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)、放射免疫法、常規(guī)生化檢測(cè)40例纈沙坦治療急性心肌梗死組和39 急性心肌梗死對(duì)照組病人入院即刻和第7天外周血的促炎癥細(xì)胞因子TNFα,促纖維化細(xì)胞因子TGF-β1，抗炎癥細(xì)胞因子IL-10，hsCRP(高敏CRP)，RAS和血脂，并用B 超檢測(cè)病人同期心臟功能。
　　 結(jié)果：與入院即刻