人類基因CXCR4、arresten的克隆、表達和arresten生物活性分析.pdf

1、趨化因子及其受體是腫瘤細胞生物學行為的重要調節(jié)因素。趨化因子和受體的結合激活細胞內G蛋白和磷脂酶C，通過刺激腫瘤細胞生長、趨化腫瘤細胞的定向遷移、增加腫瘤細胞的抗逆性和與胞外基質的黏附性等直接或間接作用促進腫瘤的生長和轉移。 人趨化因子受體CXCR4在腫瘤細胞中廣泛表達，基質細胞衍生因子SDF-1是其特異性配體。SDF-1與CXCR4的相互作用與多種腫瘤的黏附、擴散、轉移、入侵行為密切相關。制備CXCR4抗體對研究CXCR4的生

2、物學功能和腫瘤治療有重要意義。為了原核表達CXCR4并制備其抗體，將構建的pGEX-4T1-CXCR4重組質粒轉化大腸桿菌E.coliBL21(DE3)，誘導表達后發(fā)現，CXCR4全蛋白對大腸桿菌細胞有毒性作用，無法進行原核表達，但CXCR4主要配體結合部位N端肽段(1-42aa)在同一原核表達系統中能夠高效可溶性表達。分別用親和層析法和硫酸銨沉淀法對重組CXCR4N端肽段進行純化，得到純度為80％的重組CXCR4N端肽段，為下一步篩選

3、CXCR4特異性抗體奠定了基礎。 惡性腫瘤的無限制侵襲性生長和轉移依賴于血管生成(angiogenesis)，許多研究表明，抑制血管生成能有效抑制腫瘤細胞的增殖和遷移。因此，抗血管生成有望成為一種新型的腫瘤療法。 arresten是新發(fā)現的一種強有效的血管生成抑制因子，是Ⅳ型膠原蛋白a1鏈的羧基末端非膠原區(qū)-1多肽片段，研究發(fā)現arresten能有效抑制新生血管形成及腫瘤的生長和轉移。為進一步研究arresten的生物學