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文檔簡介
1、研究背景 瘢痕,尤其是病理性瘢痕(增生性瘢痕和瘢痕疙瘩),由于其給患者的身體和精神帶來嚴(yán)重?fù)p害,因此也是整形燒傷領(lǐng)域研究的重點。迄今為止,雖然有多種治療方法,但是缺乏一種普遍而確定有效的方法。 神經(jīng)生長因子(nerve growth factor,NGF)作為最早被發(fā)現(xiàn)的神經(jīng)肽之一,除了在神經(jīng)系統(tǒng)各種疾病和修復(fù)再生的重要作用,在各種炎性疾病中的作用正引起人們的關(guān)注。而其在促進(jìn)創(chuàng)面愈合方面的作用亦受到肯定。瘢痕的形成與創(chuàng)面
2、愈合序貫發(fā)生,密不可分。雖然有較多的實驗證實瘢痕中存在包括NGF在內(nèi)的多種神經(jīng)肽,但是在瘢痕形成和消退過程中,對NGF所扮演的角色和參與的過程少有較深刻和一致的研究。 基因治療是近年來在醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域迅猛發(fā)展的治療手段。隨著大量基因工程技術(shù)的深入研究,瘢痕的基因治療正成為整形燒傷界研究的熱點。這也是從根本上治愈瘢痕的有效途徑。 研究方法 在鑒定、擴(kuò)增已知重組質(zhì)粒pcDNA4/HisMax-NGF的基礎(chǔ)上,通過脂質(zhì)體
3、介導(dǎo)將重組質(zhì)粒pcDNA4/HisMax-NGF轉(zhuǎn)染至人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞和兔耳增生性瘢痕中。在成纖維細(xì)胞中應(yīng)用MTT法、免疫組化、原位雜交和實時熒光定量PCR,在兔耳增生性瘢痕中應(yīng)用測量肥大指數(shù)、HE染色、苦味酸.天狼星紅染色、免疫組化和實時熒光定量PCR,觀察重組質(zhì)粒pcDNA4/HisMax-NGF對成纖維細(xì)胞增殖和兔耳增生性瘢痕的影響,以及其轉(zhuǎn)染和表達(dá)的情況。 研究結(jié)果 脂質(zhì)體介導(dǎo)的pcDNA4/HisMax-
4、NGF重組質(zhì)粒在人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞中的轉(zhuǎn)染率為11.7[%],最佳轉(zhuǎn)染時間為轉(zhuǎn)染后48小時,能夠引起細(xì)胞增殖活性的降低,免疫組化和原位雜交均證實基因轉(zhuǎn)染成功并能夠表達(dá),實時熒光定量PCR證明轉(zhuǎn)染后NGF mRNA含量明顯增高。脂質(zhì)體介導(dǎo)的pcDNA4/HisMax-NGF重組質(zhì)粒能夠使兔耳增生性瘢痕的肥大指數(shù)降低,HE染色和苦味酸.天狼星紅染色均證實其膠原纖維減少,免疫組化證實轉(zhuǎn)染后NGF表達(dá)增加,實時熒光定量PCR證明轉(zhuǎn)染后NGF
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