肝細(xì)胞生長因子與增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變的研究.pdf

1、目的:探討肝細(xì)胞生長因子(Hepatocyte growth factor,HGF)與視網(wǎng)膜脫離(Retinal Detachment,RD)和/或伴有增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變(Proliferative Vitreoretinopathy,PVR)的關(guān)系,進(jìn)一步研究HGF對(duì)培養(yǎng)的人視網(wǎng)膜色素上皮(Retinal Pigment Epithelium,RPE)細(xì)胞形態(tài)、增生及損傷愈合的影響,初步闡明PVR病理過程中HGF的作用機(jī)理.方法:

2、同時(shí)收集34例視網(wǎng)膜脫離患者血清、玻璃體液標(biāo)本,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試劑盒檢測(cè)HGF含量;10例嚴(yán)重PVR患者行玻璃體手術(shù)時(shí)取出視網(wǎng)膜前膜(Epiretinal membrane,ERM),透射電鏡觀察其組成成分,免疫組化染色觀察HGF受體/c-Met的表達(dá).體外培養(yǎng)人RPE細(xì)胞,相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化,MTT比色法檢測(cè)RPE細(xì)胞的增生情況,細(xì)胞劃線法檢測(cè)遷移情況.免疫細(xì)胞化學(xué)方法觀察細(xì)胞角蛋白、波形蛋白、成纖維細(xì)胞特異性

3、蛋白-1(Fibroblast specific protein,Fsp-1)、HGF及其受體c-Met蛋白的表達(dá).Western Blot方法檢測(cè)Fsp-1、細(xì)胞角蛋白和E-cadherin的表達(dá).所有指標(biāo)mRNA水平均用RT-PCR方法檢測(cè).透射和掃描電鏡觀察HGF對(duì)RPE細(xì)胞單層細(xì)胞連接的影響.結(jié)果:視網(wǎng)膜脫離和/或PVR患者血清HGF濃度明顯比玻璃體液濃度低,二者無相關(guān)性;隨著PVR程度加重,玻璃體內(nèi)HGF濃度逐漸升高,但在C級(jí)

4、和D級(jí)之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異.ERM以上皮樣細(xì)胞、成纖維樣細(xì)胞為主并含有大量膠原纖維;HGF受體多在含色素顆粒細(xì)胞表達(dá).體外培養(yǎng)的人RPE細(xì)胞角蛋白、HGF及其受體c-Met蛋白、波形蛋白表達(dá)陽性.正常人RPE細(xì)胞表達(dá)HGF及其受體c-Met、Fsp-1、TGF-β<,2> mRNA,外源性HGF刺激后RPE細(xì)胞向成纖維樣形態(tài)轉(zhuǎn)化、細(xì)胞間連接破壞、促細(xì)胞遷移和增生,同時(shí)伴有Fsp-1、TGF-β<,2> mRNA表達(dá)增強(qiáng),細(xì)胸角蛋白和E-ca