FGFR2、VEGFR2和c-Cbl在胃癌組織中的表達及其臨床意義.pdf

1、胃癌是嚴重危害人類健康的最常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率位居所有惡性腫瘤的第4位，死亡率位列所有腫瘤的第2位。長期以來包括手術切除及其他綜合性治療的應用，并沒有帶來滿意的生存率，胃癌迄今仍是全球人口主要癌癥死亡原因，在中國與其它東亞國家尤其重要。 隨著腫瘤分子生物學研究的深入為腫瘤的藥物治療提供了一種新的模式：分子靶向治療。靶向治療制劑的高效低毒特性越來越引起臨床醫(yī)師的重視，目前分子靶向藥物的發(fā)展，大多集中在與細胞生長、分化以及各種

2、細胞凋亡調(diào)控機制相關的信號傳導路徑，這些信號傳導路徑多是通過一些酪氨酸激酶的活化來調(diào)控。成纖維細胞生長因子2型受體(FGFR2)和血管內(nèi)皮細胞生長因子2型受體(VEGFR2)均是受體型酪氨酸激酶，研究表明FGFR2和VEGFR2與腫瘤血管的形成密切相關，與腫瘤的分期、轉移、預后及療效密切相關，同時它們在分子靶向治療中發(fā)揮重要作用；c-Cb1最近被證明是泛素-蛋白酶體通路中的一個新的RING Finger型泛素連接酶(E3)。c-Cb1可

3、以介導受體酪氨酸激酶的降解，因此參與細胞內(nèi)信號轉導的負調(diào)控機制。 國內(nèi)外尚未見對于胃癌中FGFR2、VEGFR2和c-Cb1的表達及其相關性的研究，本研究構建胃癌組織芯片，應用免疫組化的方法，檢測三種蛋白的表達情況，分析其與臨床病理特征的關系，以及三者相互之間的聯(lián)系，旨在探討FGFR2、VEGFR2和c-Cb1在胃癌組織中的表達及其臨床意義。 材料與方法: 1、組織標本 共有124例來自于中國醫(yī)科大學附屬

4、第一醫(yī)院及遼寧省腫瘤醫(yī)院2005年10月～2006年8月手術切除的胃癌(術前未行化放療)組織標本。其中男性92例，女性32例；年齡24～85歲，中位年齡60歲；病理均為腺癌，高分化11例，中分化29例，低分化84例；侵犯肌層76例，侵犯漿膜層48例；有淋巴結轉移100例，未發(fā)生轉移24例。胃癌組織分期采用國際抗癌聯(lián)盟(UICC)1997年修訂的P-TNM分期標準：T1腫瘤局限于粘膜層或粘膜下層，T2腫瘤侵及肌層，T3腫瘤侵及漿膜下，T4

5、腫瘤穿透漿膜或侵犯周圍器官；其中Ⅰ期17例，Ⅱ期46例，Ⅲ期37例，Ⅳ期24例。124例胃癌組織取其中24例距胃癌組織5厘米以遠的正常胃組織作為對照。 2、試劑 兔抗人FGFR2多克隆抗體購自ABCAM公司；兔抗人VEGFR2多克隆抗體購自福州邁新生物技術開發(fā)有限公司；鼠抗人c-Cb1單克隆抗體購自BD公司；S-P檢測試劑盒、DAB顯色液均購自福州邁新生物技術開發(fā)有限公司。 3、方法 將124例胃癌組織與

6、24例正常胃組織標本制作成組織芯片，采用免疫組化S-P法，按照S-P檢測試劑盒說明書所示步驟進行，F(xiàn)GFR2、VEGFR2切片經(jīng)檸檬酸緩沖液(PH=6.0)微波抗原修復，c-Cb1無需抗原修復，組織芯片由上海芯超生物科技有限公司制作。 4、免疫組化結果 判定FGFR2、VEGFR2和c-Cb1均以胞膜和/或胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性染色，于顯微鏡400倍視野下隨機選取5個有代表性的不同區(qū)域，每個視野的得分由陽性細胞的比例和

7、顯色強度兩方面決定，依照陽性細胞比例：<5％、5％-25％、25％-50％、50％-75％、>75％分別得0分、1分、2分、3分、4分；依照顯色強度：未著色、淺黃色、棕黃色、棕褐色分別得0分、1分、2分、3分；將兩項得分相乘得到該視野的最終得分，選取的5個視野得分的平均值為最后得分。最后該切片按照得分分為以下四個等級：0-1分為(-)，2-4分為(+)，5-7分(++)，≥8分(+++)。 (-)為陰性， (+)為弱陽性表達， (++)

8、～(+++)為強陽性表達。 5、統(tǒng)計學分析 以SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計分析。應用四格表x2檢驗及Fisher確切概率法；采用Mann-Whitney U非參數(shù)檢驗和Spearman等級相關分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。 實驗結果: 1、FGFR2、VEGFR2和c-Cbl在胃癌組織中的表達 FGFR2、VEGFR2和c-Cbl在胃癌組織中的陽性表達率分別為77.4％、85.5％、71

9、.0％，均為高水平表達。 2、胃癌組織中FGFR2、VEGFR2和c-Cbl的表達情況與臨床病理因素的關系 FGFR2蛋白表達與浸潤深度及病理分期有關，且隨浸潤程度加深及病理分期變晚而表達增強,而與性別、年齡、分化程度及淋巴結轉移無關；VEGFR2蛋白表達與浸潤深度、淋巴結轉移及病理分期有關，且隨浸潤程度加深、淋巴結轉移及病理分期變晚而表達增強，而與性別、年齡、分化程度無關；c-Cbl蛋白表達與浸潤深度及病理分期有關，且

10、隨浸潤程度加深及病理分期變晚而表達增強,而與性別、年齡、分化程度及淋巴結轉移無關。 3、胃癌組織中FGFR2、VEGFR2和c-Cbl表達之間的相關性 FGFR2與c-Cbl的表達強度呈正相關，相關系數(shù)及P值分別為r=0.465，P=0.000;VEGFR2與c-Cbl的表達強度呈正相關，相關系數(shù)及P值分別為r=0.190，P=0.035。 4、胃癌組織中FGFR2、VEGFR2和c-Cbl蛋白均強陽性表達與臨床

11、病理特征之間的關系124例胃癌組織病理標本中共有26例三種蛋白同時呈強陽性表達，在分化程度差，腫瘤組織浸潤程度深，淋巴結轉移數(shù)目多及分期晚的病例中更多見。 結論: 1、FGFR2、VEGFR2和c-Cb1在胃癌中高表達；FGFR2及c-Cbl蛋白的表達強度與胃癌的浸潤深度及病理分期均呈正相關；VEGFR2的表達強度與胃癌的浸潤深度，淋巴結轉移及病理分期呈正相關；三者同時強陽性表達更多見于分化差，浸潤程度深，淋巴結轉移數(shù)目