c-Cbl、Cbl-b和EGFR在胃癌組織中的表達及其臨床意義.pdf

1、目前，胃癌仍是一個重要的公共衛(wèi)生問題，世界范圍內(nèi)，胃癌的發(fā)病位于所有惡性腫瘤的第四位，是癌癥死亡原因的第二位。全世界每年有1，000，000的新發(fā)病例。我國是胃癌的高發(fā)國家，占所有惡性腫瘤的第二位。手術治療是治愈胃癌的唯一手段，但是大多數(shù)患者在診斷時已經(jīng)處于疾病晚期，化療仍是晚期胃癌的主要治療方法。胃癌目前尚無標準的化療方案，現(xiàn)有化療方案的療效亦難盡如人意。分子靶向治療是近年來在血液和實體腫瘤的治療中涌現(xiàn)出來的新治療手段。隨著胃癌發(fā)生、

2、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過程中分子生物學機制的研究進展，也逐步將分子靶向治療應用于胃癌治療的臨床實踐。 EGFR是目前分子靶向治療的研究熱點，以EGFR為靶點的分子靶向治療已經(jīng)廣泛應用與臨床。EGFR是ErbB家族的成員之一，是一種170KD的膜受體蛋白，具有酪氨酸激酶活性，結(jié)合生長因子能夠活化細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導，促進細胞的增殖，而受體本身則發(fā)生內(nèi)化及下調(diào)。近年來的研究顯示，Cb1蛋白在下調(diào)EGFR的過程中發(fā)揮重要作用。c-Cb1及Cb1-b是C

3、BL家族兩個重要成員，具有連接體功能及E3泛素連接酶功能，能靶向一系列蛋白質(zhì)使之降解，包括以EGFR為代表的一系列具有酪氨酸激酶活性的受體蛋白，在維持機體穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮重要作用。c-Cb1和Cb1-b結(jié)構上包含若干功能區(qū)：1個N端酪氨酸激酶結(jié)合區(qū)(TKB)、環(huán)指(RF)區(qū)、TKB和RF之間保守的銜接區(qū)(Linker結(jié)構域)、以及具有泛素連接酶活性的C末端。目前，國內(nèi)外對于胃癌中c-Cb1、Cb1-b和EGFR的表達及其相關性的研究較少，現(xiàn)有

4、的研究顯示，EGFR是胃癌的獨立預后指標，而尚未發(fā)現(xiàn)c-Cb1與胃癌預后存在相關性，尚未見Cb1-b在胃癌中的相關研究。本研究制作胃癌組織芯片，應用免疫組化的方法，檢測三種蛋白在胃癌中的表達情況，分析其與胃癌臨床病理特征的關系，以及三者之間的相互聯(lián)系，旨在探討c-Cb1、Cb1-b和EGFR在胃癌組織中的表達及其臨床意義。 材料和方法: 1、病例和標本 共有124例來自于中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院及遼寧省腫瘤醫(yī)院2

5、005年10月～2006年8月手術切除的胃癌(術前未行放化療)組織標本。其中男性92例，女性32例。年齡24～85歲，中位年齡60歲。病理均為腺癌，高分化(乳頭狀腺癌，高分化管狀腺癌)11例，中分化(中分化管狀腺癌)29例，低分化(低分化腺癌，印戒細胞癌，粘液腺癌)84例。胃癌組織分期采用國際抗癌聯(lián)盟(UICC)1997年修訂的P-TNM分期標準，癌組織浸潤深度劃分如下：t1粘膜層或粘膜下層，t2肌層或漿膜下，t3穿透漿膜，t4侵犯臨近

6、結(jié)構；其中t1為3例，t2為73，t3為40例，t4為8例；未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移24例，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移100例；發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移者5例，未發(fā)生者119例；Ⅰ期17例，Ⅱ期46例，Ⅲ期37例，Ⅳ期24例。124例胃癌組織取其中24例距胃癌組織5厘米以遠的正常胃組織作為對照。 2、試劑 鼠抗人c-Cb1單克隆抗體購自BD公司；鼠抗人Cb1-b單克隆抗體購自SANTACRUZ公司；鼠抗人EGFR單克隆抗體、S-P檢測試劑盒及DAB顯色

7、液均購自福州邁新生物技術開發(fā)有限公司。 3、方法 將124例胃癌標本與24例正常胃組織標本制作成組織芯片，采用免疫組化S-P法，按照S-P檢測試劑盒說明書所示步驟進行。 4、免疫組化結(jié)果 判定c-Cb1、Cb1-b和EGFR均以胞膜和/或胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性染色，于顯微鏡400倍視野下隨機選取5個有代表性的不同區(qū)域，每個視野的得分由陽性細胞的比例和顯色強度兩方面決定，依照陽性細胞比例：<5％、5％-2

8、5％、25％-50％、50％-75％、>75％分別得0分、1分、2分、3分、4分；依照顯色強度：未著色、淺黃色、棕黃色、棕褐色分別得0分、1分、2分、3分；將兩項得分相乘得到該視野的最終得分，選取的5個視野得分的平均值為最后得分。最后該切片按照得分分為以下四個等級：0-1分為(-)，2-4分為(+)，5-7分(++)，≥8分為(+++)。(-)為陰性，(+)為弱陽性表達，(++)～(+++)為強陽性表達。 5、統(tǒng)計學分析

9、 以SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料組間比較應用四格表x2檢驗。C-Cb1、Cb1-b和EGFR表達情況為有序等級資料，組間比較采用Mann-Whitney U非參數(shù)檢驗；相關性分析采用Spearman等級相關分析。顯著水平α=0.05。 實驗結(jié)果: 1、c-Cb1、Cb1-b和EGFR在胃癌組織中的表達c-Cb1、Cb1-b和EGFR在胃癌組織中的陽性表達率分別為71.0％、82.3％和56.5％，均為高水平

10、表達。 2、胃癌組織中c-Cb1、Cb1-b和EGFR的表達情況與臨床病理因素的關系c-Cb1蛋白表達與浸潤深度及病理分期有關，且隨浸潤程度加深及病理分期變晚而表達增強，而與性別、年齡、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關；Cb1-b蛋白表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及病理分期有關，且隨著有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及病理分期變晚而表達增強，與性別、年齡、分化程度及浸潤深度無關；EGFR蛋白表達與浸潤深度及病理分期有關，且隨浸潤程度加深及病理分期變晚而表達增強，而與性別

11、、年齡、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關。 3、胃癌組織中c-Cb1、Cb1-b和EGFR表達之間的相關性c-Cb1蛋白、Cb1-b蛋白與EGFR蛋白的表達強度均呈正相關。 4、胃癌組織中c-Cb1、Cb1-b與EGFR蛋白三者均強陽性表達與臨床病理特征之間的關系124例胃癌組織病理標本中共有27例三種蛋白同時呈強陽性表達，在分化程度差，腫瘤組織浸潤程度深，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目多及分期晚的病例中更多見。 結(jié)論: 1、c

12、-Cb1、Cb1-b與EGFR在胃癌中高水平表達；c-Cb1蛋白的表達強度與胃癌的浸潤深度及病理分期呈正相關；Cb1-b蛋白的表達強度與胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及病理分期呈正相關；EGFR蛋白的表達強度與胃癌的浸潤深度及病理分期呈正相關。三者同時強陽性表達更多見于分化程度差，浸潤程度深，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目多及分期晚的病例中。間接提示三種蛋白的陽性表達可能作為腫瘤預后的判斷指標，尤其是三者同時呈強陽性表達。C-Cb1、Cb1-b和EGFR表達強度均呈