T細(xì)胞活化中NF-κB通過特異性結(jié)合Cbl-b啟動(dòng)子序列負(fù)向調(diào)控Cbl-b表達(dá).pdf

1、NF-κB和Cbl-b均是T細(xì)胞活化信號(hào)網(wǎng)絡(luò)中重要分子,其調(diào)控關(guān)系尚不完全清除。研究發(fā)現(xiàn)Cbl-b可影響T細(xì)胞內(nèi)NF-κB水平。鑒于信號(hào)分子間調(diào)控作用的相互性,我們設(shè)想NF-κB是否對(duì)Cbl-b也有調(diào)控作用?因此,我們分離一種T細(xì)胞特異性NF-κB活化障礙小鼠的T細(xì)胞,westernblot發(fā)現(xiàn)其Cbl-b顯著升高。利用AliBaba2.1軟件分析,發(fā)現(xiàn)Cbl-b啟動(dòng)子中含有可與NF-κB結(jié)合的核苷酸序列。這初步證實(shí)我們的設(shè)想。本項(xiàng)目將

2、進(jìn)一步利用EMSA來驗(yàn)證NF-κB與預(yù)測的Cbl-b啟動(dòng)子中特定核苷酸序列結(jié)合及其特異性。通過轉(zhuǎn)染質(zhì)粒構(gòu)建NF-κBP65超量表達(dá),并通過雙報(bào)告基因技術(shù)觀察其對(duì)CBL-B啟動(dòng)子序列介導(dǎo)的蛋白翻譯和轉(zhuǎn)錄的影響。還將應(yīng)用小分子化合物下調(diào)T細(xì)胞內(nèi)NF-κB,同時(shí)監(jiān)測Cbl-bmRNA的相應(yīng)變化和T細(xì)胞活化情況。同時(shí)通過用小分子化合物體內(nèi)應(yīng)用于CBL-B敲除小鼠的心臟移植模型,觀察此NF-κB抑制劑在野生型小鼠上引導(dǎo)的心臟移植物存活延長的效應(yīng)能