腸球菌、檸檬酸桿菌和芽孢桿菌對鯉魚前腸粘液的體外粘附研究.pdf

1、為研究細(xì)菌對鯉魚(Cyprinuscarpio)腸道的粘附特性、建立有效篩選鯉魚腸道益生菌的方法，本試驗采用體外固定鯉魚前腸粘液于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，并結(jié)合同位素示蹤的方法，研究了9株細(xì)菌的粘附特性和作用機(jī)理，以及有益細(xì)菌對病原菌粘附的抑制作用。 本試驗從四川農(nóng)業(yè)大學(xué)教學(xué)農(nóng)場水產(chǎn)養(yǎng)殖基地養(yǎng)殖池、動物微生態(tài)實驗室水族箱和鯉魚腸道共分離出20株細(xì)菌(CM2、WP1、WP2、WP3、GL1、GL2、CI1、WL1、C3、Z2，D1、D2

2、、D3、D4、E1、E2、E3、L1、L2、L3)，以及四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動物微生態(tài)實驗室保存的8株芽孢桿菌(JS01、D9401、ND1、ND2、ND3、ND4、ND5和ND6)作為本實驗的試驗菌株。 通過常規(guī)的耐熱試驗和雙層平板法拮抗試驗，篩選出具有一定耐熱性并對致病性大腸桿菌和嗜水氣單胞菌具有拮抗作用的5株細(xì)菌(Z3、C3、L2、E2、D2)，通過16SrRNA測序，進(jìn)行菌種的鑒定，最后確定為2株芽孢桿菌(Bacillus])，

3、2株腸球菌(Enterococcus)和1株檸檬酸桿菌((Citrobacter)。 本試驗中，由于同位素標(biāo)記物γ-32P-ATP是粘附試驗的示蹤材料，因此做了γ-32P-ATP對細(xì)菌生長影響的試驗。實驗結(jié)果表明：添加同位素標(biāo)記物的細(xì)菌均出現(xiàn)活菌數(shù)降低的情況，但是差異不明顯，甚至有些細(xì)菌出現(xiàn)活菌數(shù)增加的現(xiàn)象，說明所有細(xì)菌在培養(yǎng)過程中盡管添加了同位素γ-32P-ATP，但是其活菌數(shù)均不受影響，能達(dá)到試驗所需要細(xì)菌數(shù)量(108～10

4、9cfu/ml)。 對來源于魚腸道的腸球菌和檸檬酸桿菌以及養(yǎng)殖環(huán)境中的芽孢桿菌的附著活性、細(xì)菌表面凝集素和粘液蛋白的受體的化學(xué)組成、其對病原菌附著鯉魚前腸粘液的影響等進(jìn)行了研究。試驗結(jié)果表明：魚源的腸球菌的相對粘附數(shù)量極顯著高于異源的芽孢桿菌(p＜0.01)，同源的檸檬酸桿菌與異源芽孢桿菌的相對粘附數(shù)量差異不顯著(p＞0.05)。致病性強(qiáng)的嗜水氣單胞菌AH2相對粘附數(shù)量極顯著高于嗜水氣單胞菌AH1、大腸桿菌CVCC2060和大腸

5、桿菌ATCC25922(p＜0.01)。5種菌經(jīng)高碘酸鈉和蛋白水解酶修飾后的附著試驗表明，高碘酸鈉能極顯著降低芽孢桿菌、腸球菌和檸檬酸桿菌的粘附率(p＜0.01)，而蛋白水解酶修飾對多數(shù)菌株的影響不顯著(p＞0.05)。粘液蛋白經(jīng)蛋白水解酶處理后，部分菌對其的附著數(shù)量顯著降低(p＜0.05)，而粘液蛋白經(jīng)高碘酸鈉處理后，5株菌的粘附率顯著上升(p＜0.05)。由于細(xì)菌表面的凝結(jié)素存在差異，導(dǎo)致其相對粘附數(shù)量的不同。因此，作為鯉魚腸道的原