Shugoshin1在非小細胞肺癌多西紫杉醇耐藥中的作用及機制研究.pdf

1、肺癌是目前全世界死亡率最高的惡性腫瘤。絕大多數(shù)患者就診時已為晚期,喪失手術機會?；熓沁@類患者的主要治療手段,其中紫杉類藥物是目前非小細胞肺癌化療中最常用且有顯著療效的新一代藥物,但在治療過程中腫瘤細胞對其產(chǎn)生耐藥性是化療失敗的主要原因。因此,如何克服非小細胞肺癌對紫杉類藥物的耐藥是肺癌治療過程中亟需解決的重要問題。目前對紫杉類藥物耐藥機制的研究包括P-gp蛋白,MRP蛋白的高表達,微管β亞基及α亞基的突變,凋亡基因的改變及細胞DNA修

2、復系統(tǒng)的加強等等。但上述機制仍不能圓滿解釋腫瘤的MDR現(xiàn)象。SGO1是我們前期研究中利用CellomicsArrayScan平臺篩選出的一個肺癌相關新分子。在前期的研究發(fā)現(xiàn):SGO1(shugoshin-1)可能是導致非小細胞肺癌發(fā)生的關鍵分子,研究中還發(fā)現(xiàn)SGO1主要影響細胞分裂G2/M期,而紫杉類藥物正是通過阻滯腫瘤細胞停留在G2/M期來發(fā)揮細胞毒性作用,但其與紫衫類藥物耐藥的關系還尚未有任何研究報道。進而我們用化療藥物多西紫杉醇通

3、過瞬時反復作用的方法篩選出多西紫杉醇耐藥的細胞株A549/Taxotere并檢測SGO1的表達,進一步通過構建SGO1表達上調和下調的非小細胞肺癌細胞亞系,研究SGO1在非小細胞肺癌多西紫杉醇耐藥中的作用,為SGO1逆轉多西紫杉醇耐藥提供證據(jù)。
　　目的:
　　1.培養(yǎng)對多西紫杉醇耐藥的非小細胞肺癌細胞A549/Taxotere,檢測其SGO1的表達。2.構建SGO1表達上調和下調的非小細胞肺癌細胞亞系,研究SGO1在非小細

4、胞肺癌多西紫杉醇耐藥中的作用。
　　3.進一步研究SGO1影響非小細胞肺癌多西紫杉醇的耐藥機制。
　　方法:
　　1.通過RT-PCR,Westernblot檢測A549/Taxotere中SGO1的表達。
　　2.通過構建SGO1的si-RNA質粒和正義表達質粒經(jīng)慢病毒包裝分別轉染A549/Taxotere及親本A549細胞,分別命名為siSGO1-LV-A549/Taxotere和SGO1-LV-A549利用

5、Western-blot及RT-qPCR鑒定其干預效果。
　　3.利用MTT比色法觀察外源性改變SGO1的表達后,SGO1-LV-A549及siSGO1-LV-A549/Taxotere對多西紫杉醇藥物敏感性的影響。
　　4.通過AnnexinV/PI染色法檢測SGO1上調及下調的非小細胞肺癌細胞系中多西紫杉醇誘導細胞凋亡的變化,并計算凋亡指數(shù)。
　　5.借助流式細胞儀檢測SGO1上調及下調的非小細胞肺癌細胞系中多西紫

6、杉醇誘導非小細胞肺癌細胞周期的變化。
　　6.利用RT-qPCR和Westernblot方法檢測轉染SGO1正義表達細胞株和小干擾RNA載體細胞株中P-gp,Bcl-2,Bax的表達差異。
　　結果:
　　1.SGO1在多西紫杉醇耐藥的非小細胞肺癌細胞株A549/Taxotere中mRNA及蛋白表達水平明顯增高。
　　2.與對照細胞相比,轉染正義SGO1表達載體的非小細胞肺癌細胞對多西紫杉醇敏感性明顯降低;加藥后

7、,G2/M期細胞比例明顯增減;多西紫杉醇誘導的細胞凋亡指數(shù)明顯減少,轉染細胞內(nèi)的Bcl-2表達顯著增強,Bax的表達顯著減弱;細胞內(nèi)P-gp表達增加(P<0.05)。
　　3.與對照細胞相比,轉染SGO1siRNA的非小細胞肺癌細胞能明顯逆轉對多西紫杉醇的抵抗;加藥后,G2/M期細胞相應增加;多西紫杉醇誘導的細胞凋亡指數(shù)明顯增加,轉染細胞內(nèi)的Bcl-2表達減弱,Bax的表達明顯增強,細胞內(nèi)P-gp表達降低(P<0.05)。

8、　　結論:
　　1.SGO1高表達與非小細胞肺癌細胞對多西紫杉醇的耐藥密切相關。
　　2.成功建立SGO1上調非小細胞肺癌細胞株,其通過抑制促凋亡分子Bax的表達,增強抑制凋亡分子Bcl-2的表達來降低化療藥物誘導的細胞凋亡,通過減少G2/M期阻滯,增加P-gp蛋白表達這些途徑降低細胞對多西紫杉醇的敏感性。
　　3.成功建立SGO1下調非小細胞肺癌細胞株,其通過上調促凋亡分子Bax的表達,下調抑制凋亡分子Bcl-2的表