野罌粟水煎劑對(duì)番瀉葉致瀉小鼠止瀉作用的機(jī)理研究.pdf

1、腹瀉既是一種獨(dú)立的疾病，又是多種疾病病理進(jìn)程中的一個(gè)癥狀。統(tǒng)計(jì)表明，我國(guó)每年有8.36億人次患腹瀉，因此衛(wèi)生部把腹瀉列為我國(guó)重點(diǎn)防治的疾病之一。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，腹瀉病因諸多、病機(jī)復(fù)雜，其發(fā)病基礎(chǔ)是胃腸道的分泌、消化、吸收和運(yùn)動(dòng)等障礙，使分泌量增加，食物不能完全分解，吸收量減少和腸胃蠕動(dòng)加速等所致。其中，炎癥介質(zhì)是一類致瀉性自體活性物質(zhì)，臨床所見的多數(shù)腹瀉性疾病(包括感染性和非感染性)大多是由于致病因子使腸道發(fā)生炎癥，釋放出各種炎癥介質(zhì)

2、造成的。因此，抗腹瀉藥物可通過(guò)抗炎，如抑制炎癥的發(fā)生、發(fā)展或炎癥介質(zhì)的合成、釋放，產(chǎn)生止瀉效果。 野罌粟(Papaver nudicaule L．)為罌粟科罌粟屬多年生草本雙子葉植物，用于止瀉在北方各少數(shù)民族中沿用已久，在以往的研究中發(fā)現(xiàn)，野罌粟蒴果和全草的水提物具有止瀉作用強(qiáng)，發(fā)揮作用迅速，能迅速緩解甚至消除腹瀉及伴隨癥狀一腹痛，與同類藥物比較在不改變胃腸菌群環(huán)境而發(fā)揮抗腹瀉作用方面具有明顯的優(yōu)勢(shì)。因此從現(xiàn)代科學(xué)角度深入研究和

3、揭示民族醫(yī)藥的物質(zhì)基礎(chǔ)、作用機(jī)理，將對(duì)民族醫(yī)藥的研發(fā)、生產(chǎn)和臨床使用產(chǎn)生重要影響。本實(shí)驗(yàn)研究探討野罌粟水煎劑抗腹瀉的作用機(jī)理，集中于其對(duì)腸上皮細(xì)胞的保護(hù)作用以及止痛抗炎作用的研究。 研究?jī)?nèi)容包括文獻(xiàn)綜述和實(shí)驗(yàn)研究?jī)蓚€(gè)部分。文獻(xiàn)綜述部分討論了中醫(yī)藥防治急慢性腹瀉的研究概況以及民族醫(yī)藥野罌粟止瀉作用的研究進(jìn)展。實(shí)驗(yàn)研究部分采用番瀉葉灌胃制造出小鼠腹瀉模型，研究野罌粟水煎劑對(duì)腹瀉小鼠的行為學(xué)，小鼠小腸的形態(tài)學(xué)、病理學(xué)方面改變的影響及血

4、清中白細(xì)胞介素-1(IL-1β)的含量和組織中腫瘤壞死因子(TNF-α)的表達(dá)，以及細(xì)胞問(wèn)黏附分子-1(ICAM-1)和增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)的表達(dá)及其對(duì)腸上皮細(xì)胞的影響。實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果如下： 1．野罌粟水煎劑對(duì)腹瀉小鼠的行為學(xué)及小腸黏膜組織病變的影響 小鼠在灌胃番瀉葉的第四天均不同程度的出現(xiàn)明顯的腹瀉，表現(xiàn)為便次增多，便質(zhì)稀軟。到第七天時(shí)小鼠呈明顯的消瘦狀態(tài)，且皮毛污穢并出現(xiàn)了倦怠乏力，精神萎靡，厭食等癥狀，腹瀉現(xiàn)象

5、也明顯加劇。藥物干預(yù)3天后，各給藥組的小鼠腹瀉癥狀明顯改善，表現(xiàn)為便數(shù)減少，便質(zhì)由稀水樣轉(zhuǎn)為粘稠，精神狀態(tài)良好，飲食正常，情緒稍見興奮，體重增加不明顯。 HE染色，光鏡下觀察：正常小腸組織結(jié)構(gòu)清晰完整，粘膜排列規(guī)則整齊。絨毛上皮吸收細(xì)胞胞漿豐富，淡染，胞核位于基部，呈橢圓形，核仁清楚，相鄰細(xì)胞頂部有完善的緊密連接。杯狀細(xì)胞數(shù)目較少，散在分布。固有層內(nèi)未見淋巴細(xì)胞等炎細(xì)胞浸潤(rùn)。腹瀉模型組小腸外觀均有不同程度的粘膜充血、水腫、腸腔變

6、大增粗現(xiàn)象。病理切片顯示，小腸粘膜腫脹，絨毛脫落，失去小腸正常結(jié)構(gòu)，上皮細(xì)胞水腫，細(xì)胞間連接結(jié)構(gòu)出現(xiàn)缺損。杯狀細(xì)胞明顯增多，大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。各給藥組小鼠腸道組織的充血、水腫情況均有改善。小腸黏膜輕度腫脹，絨毛基本無(wú)脫落、結(jié)構(gòu)清晰，少量或無(wú)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。 2．野罌粟水煎劑對(duì)腹瀉過(guò)程中炎癥反應(yīng)的干預(yù)作用 胃腸道不僅是消化器官，也是重要的免疫器官。當(dāng)免疫功能發(fā)生異常時(shí)，如過(guò)渡免疫應(yīng)答或免疫耐受，將會(huì)導(dǎo)致各種胃腸道疾病，可引起

7、機(jī)體免疫功能失衡。而TNF-α和IL-1 β是機(jī)體免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)中的基本細(xì)胞因子，參與機(jī)體多種組織細(xì)胞的生長(zhǎng)分化和功能調(diào)節(jié)，在免疫和炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。炎癥細(xì)胞因子水平的升高，可進(jìn)一步激發(fā)炎癥進(jìn)程，引起腸黏膜的損傷，出現(xiàn)黏膜充血水腫，甚至糜爛、出血。由于TNF-α和IL-1 β均具有強(qiáng)烈的致炎活性，可直接作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，使其通透性增加，導(dǎo)致腸壁大量滲出，故高水平的TNF-α和IL-1 β在一定程度上可反映腸壁通透性增加，并可導(dǎo)致一

8、系列的腹瀉癥狀發(fā)生。 本實(shí)驗(yàn)依據(jù)腹瀉發(fā)生時(shí)炎癥反應(yīng)的特點(diǎn)，采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)和免疫組織化學(xué)的方法，通過(guò)定量和定性的分析血清和組織中的IL-1 β和TNF-α的水平變化來(lái)說(shuō)明野罌粟水煎劑對(duì)腹瀉過(guò)程中炎癥反應(yīng)的抑制作用。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，腹瀉模型組小鼠血清中的IL-1 β含量與正常組相比明顯升高；小腸組織切片中的TNF-α陽(yáng)性表達(dá)也顯著增加。而野罌粟各個(gè)治療組小鼠血清中的IL-1 β含量較模型組明顯降低；同時(shí)TN

9、F-α表達(dá)出的棕黃色顆粒較模型組也明顯減少。說(shuō)明野罌粟能夠抑制腹瀉過(guò)程中IL-1 β和TNF-α的表達(dá)，減輕腹瀉中的炎癥反應(yīng)，改善腹瀉癥狀并減輕腹痛。這可能是野罌粟能有效止瀉的作用機(jī)理之一。 3．野罌粟水煎劑對(duì)腹瀉小鼠腸上皮細(xì)胞的保護(hù)作用 白細(xì)胞的過(guò)度激活是腹瀉病理過(guò)程中的一個(gè)重要環(huán)節(jié)，ICAM-1作為免疫調(diào)節(jié)因子，通過(guò)受配體相互作用，介導(dǎo)白細(xì)胞不同亞群間的接觸和粘附，調(diào)節(jié)白細(xì)胞的功能活性和免疫反應(yīng)。嚴(yán)重腹瀉可引起腸粘膜

10、損傷，腸通透性增加，腸屏障功能障礙。而且近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，增殖細(xì)胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)可反映腸粘膜上皮細(xì)胞的增殖狀況，對(duì)腸粘膜的增殖和修復(fù)有重要的意義。 本實(shí)驗(yàn)用免疫組織化學(xué)的方法分別探討野罌粟水煎劑對(duì)腹瀉小鼠腸道組織中的ICAM-1和PCNA表達(dá)的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，模型組的ICAM-1較正常組表達(dá)明顯增多。野罌粟各組與模型組比較表達(dá)均有減少，以野罌粟高劑量組最為顯