白芨水煎劑對(duì)變形鏈球菌影響的體外研究.pdf

1、目的：齲病是細(xì)菌感染性疾病，變形鏈球菌(簡(jiǎn)稱變鏈菌)是目前所公認(rèn)的主要的致齲菌之一。白芨是傳統(tǒng)的中草藥，臨床應(yīng)用廣泛，毒副作用較小，具有殺菌、消炎作用。雖然白芨在防齲中藥中有所提及，但是相關(guān)的實(shí)驗(yàn)研究很少。本研究通過白芨水煎劑(BSD)對(duì)變鏈菌生長(zhǎng)、產(chǎn)酸、粘附以及產(chǎn)胞外多糖的影響，初步探討中藥白芨成為防齲藥物的可能性。 方法: 1、白芨水煎劑和變鏈菌標(biāo)準(zhǔn)菌液的制備取白芨55g，干燥，粉碎，水提取前冷浸1小時(shí)，用蒸餾水14

2、30ml(26倍加水量)煎煮2次，共煎煮4小時(shí)。無菌4層紗布過濾雜質(zhì)，合并濾液濃縮至55ml，此為1g/ml的BSD，備用。 變鏈菌標(biāo)準(zhǔn)菌株按說明書溶解，放入牛心腦浸液(BHI)固體培養(yǎng)基中，厭氧環(huán)境下復(fù)蘇48小時(shí)。之后將菌種接種于胰蛋白酶大豆(TS)液體培養(yǎng)基中，增菌18小時(shí)。涂片檢查為純培養(yǎng)后，將菌液在4℃下3000 r·min<'-1>離心15分鐘，收集細(xì)菌，用無菌生理鹽水洗菌2次，并用其調(diào)整，使菌懸液在540nm處吸光度

3、等于1.0，備用。 2、白芨水煎劑對(duì)變鏈菌生長(zhǎng)的影響1g/ml的白芨水煎劑和已溶化的BHI固體培養(yǎng)基采用倍比稀釋法，使最終培養(yǎng)基含藥液濃度分別為250.00mg/ml、125.00mg/ml、62.50 mg/ml、31.25mg/ml、15.62mg/ml、7.81mg/ml、3.90mg/ml、1.95mg/ml、0.98mg/ml。按CLSI/NCCLS推薦的瓊脂稀釋法測(cè)定實(shí)驗(yàn)菌株的MIC值。 3、白芨水煎劑對(duì)變鏈

4、菌產(chǎn)酸作用的影響根據(jù)BSD對(duì)變鏈菌．MIC測(cè)定結(jié)果，選取MIC值以下4個(gè)濃度梯度，配制含1％蔗糖的TS液體培養(yǎng)基。采用酸度計(jì)調(diào)定初始PH值為7.4，接種等量的變鏈菌懸液。用PHS-25數(shù)顯PH計(jì)測(cè)定培養(yǎng)物上清液的PH值，并求出培養(yǎng)前后的△PH值。實(shí)驗(yàn)共分5組(4個(gè)不同濃度的實(shí)驗(yàn)組和1個(gè)對(duì)照組)，每組4個(gè)平行管，每管測(cè)定3次，結(jié)果取平均值。 4、白芨水煎劑對(duì)變鏈菌粘附作用的影響采用比濁法。選取白芨水煎劑MIC值以下4個(gè)濃度，每管中

5、插入已滅菌的直徑為0.8mm牙用不銹鋼絲一根及等量菌懸液，厭氧(80％N<,2>、10％CO<,2>、10％H<,2>)培養(yǎng)24小時(shí)后換上新鮮培養(yǎng)液，同等條件下再培養(yǎng)24小時(shí)；取出鋼絲，將鋼絲上粘附的細(xì)菌洗脫下來，分別測(cè)OD值。實(shí)驗(yàn)共分6組(4個(gè)不同濃度的實(shí)驗(yàn)組和陰性、陽性2個(gè)對(duì)照組)，每組4個(gè)平行管，每管測(cè)定3次，結(jié)果取平均值。 5、白芨水煎劑對(duì)變鏈菌產(chǎn)胞外多糖作用的影響本研究采用葸酮測(cè)多糖技術(shù)，測(cè)量BSD對(duì)變鏈菌產(chǎn)水溶性(樣