不同齲敏感兒童變形鏈球菌臨床分離株體外致齲性研究.pdf

1、目的：探討不同齲敏感兒童口腔變形鏈球菌臨床分離株的產(chǎn)酸、耐酸及合成細(xì)胞外多糖能力的差異，分析其毒力因子在致齲過(guò)程中所起的作用，從而為完善乳牙齲危險(xiǎn)性預(yù)測(cè)方法及乳牙齲的預(yù)防提供有力的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 1．以高齲，齲失補(bǔ)指數(shù)(decayed，missing，filledteeth index，dmft)≥6、中齲，6>dmft≥4，無(wú)齲,dmft=0兒童口腔中分離得到的不同基因型的變形鏈球菌111株(其中高齲組44株

2、，中齲組36株，無(wú)齲組31株)為實(shí)驗(yàn)菌株，以國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)菌株變形鏈球菌(S．mutans)ATCC 25175(血清型C)為陽(yáng)性對(duì)照，于輕唾瓊脂(MS)平板復(fù)蘇，取典型菌落接種于牛心腦浸液(Brain Heart Infusion，BHI)中增菌24 h，涂片檢查為純培養(yǎng)后，配制相同濃度的菌懸液(A 540nm=1.0)，加入含5％蔗糖，不同pH值(以0.5為間隔，pH4.0-7.0)的BHI液體培養(yǎng)基中厭氧(80％N2、10％H2、10％

3、CO2)培養(yǎng)48h后，采用精密酸度計(jì)pHS-3C，測(cè)定培養(yǎng)物上清液的終末pH值，比較細(xì)菌的產(chǎn)酸能力(△pH)；將相同菌液濃度的變形鏈球菌臨床分離株菌懸液和標(biāo)準(zhǔn)株菌懸液分別在不同pH(以0.5為間隔，pH 4.0～7.0)的BHI液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)48h后，用紫外分光光度計(jì)在540nm處測(cè)定吸光度，比較細(xì)菌的生長(zhǎng)情況。 2．取相同濃度的各變形鏈球菌臨床分離株菌懸液和標(biāo)準(zhǔn)株的菌懸液，按菌液與含1％蔗糖的BHI液體培養(yǎng)基1:10(v、v

4、)比例接種細(xì)菌，37℃厭氧培養(yǎng)24h，離心，收集上清液，細(xì)菌沉淀物用5ml蒸餾水洗滌、離心兩次，三次上清液合并；水沈后的細(xì)菌加入0.5mol/L NaOH5ml洗滌、離心三次，合并上清液。兩部分上清液各取2ml，分別加入三倍體積無(wú)水乙醇，4℃冰箱放置過(guò)夜，離心，棄水相，沉淀分別加入5ml蒸餾水及5ml 0.1 mol/LNaOH溶液溶解，用葸酮法分別測(cè)定水溶性及水不溶性葡聚糖含量。 結(jié)果： 1．兒童高、中齲組患者口腔中分

5、離出的變形鏈球菌臨床分離株產(chǎn)酸和耐酸能力明顯高于無(wú)齲組患者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)，但與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)菌株比較，無(wú)顯著性差異(p>0.05)。在同一個(gè)體所帶不同基因型變形鏈球菌菌株的產(chǎn)酸能力和耐酸能力有差異，高齲組存在部分菌株產(chǎn)酸耐酸能力明顯高于其他菌株。 2．不論是產(chǎn)水溶性葡聚糖還是水不溶性葡聚糖能力，高、中齲組和標(biāo)準(zhǔn)株無(wú)明顯不同，但是均強(qiáng)于無(wú)齲組(p<0.05)；同一個(gè)體所分離的不同基因型變形鏈球菌菌株合成胞外多糖的能