老年人高齲患者牙菌斑中變形鏈球菌臨床分離株致齲性的研究.pdf

1、本課題通過(guò)收集老年人牙菌斑變形鏈球菌臨床分離株，進(jìn)行血清型、遺傳型分析；體外培養(yǎng)分析其代謝產(chǎn)酸和在酸性條件下耐酸生存能力、合成胞外多糖的能力、體外黏附能力。并與標(biāo)準(zhǔn)菌株比較，分析其致齲毒力水平。從而，為進(jìn)一步研究老年人齲病的發(fā)病特點(diǎn)和預(yù)防措施奠定基礎(chǔ)。研究?jī)?nèi)容如下：　　實(shí)驗(yàn)一：老年人牙菌斑中變形鏈球菌的分離、鑒定和分型。采集老年人齦上菌斑，厭氧培養(yǎng)，通過(guò)菌落、形態(tài)學(xué)檢查和系列生理生化特征鑒定，采用雙向瓊脂擴(kuò)散、AP-PCR技術(shù)分別進(jìn)行

2、血清型及遺傳型分析。結(jié)果表明，變形鏈球菌在老年人高齲組的檢出率為96.49％，高于無(wú)齲組(其檢出率為75.00％)，這說(shuō)明變形鏈球菌在老年人齲病發(fā)生中起著重要作用；血清型c占86.70％，其它血清型為13.70％；用引物OPA-5分析變形鏈球菌(血清型c)臨床分離株的AP-PCR帶型：在55例高齲患者中：3例攜帶1種基因型、42例攜帶2種基因型、8例攜帶3種基因型、2例攜帶4種基因型，在24例無(wú)齲者中：19例攜帶1種基因型、5例攜帶2種

3、基因型。共發(fā)現(xiàn)101種不同的擴(kuò)增帶型，并且不同個(gè)體攜帶有不同的基因型菌株，表明從不同個(gè)體分離出的變形鏈球菌菌株間具有明顯的遺傳多態(tài)性。 實(shí)驗(yàn)二：老年人牙菌斑中變形鏈球菌臨床分離株代謝產(chǎn)酸和在酸性條件下生存的耐酸能力。 體外培養(yǎng)變形鏈球菌株臨床分離株，以pH計(jì)測(cè)定培養(yǎng)物終末pH值，計(jì)算分離株降低pH值的能力，以pH的差值(△pH)表示。結(jié)果表明，隨著pH值的降低，高齲組和無(wú)齲組中變形鏈球菌臨床分離株及UA159產(chǎn)酸能力均呈

4、下降趨勢(shì)；當(dāng)pH值為5.5時(shí)，變形鏈球菌的產(chǎn)酸能力受到明顯抑制，當(dāng)pH值為5.0時(shí)，無(wú)齲組中普遍不產(chǎn)酸，但高齲組同一個(gè)體中有幾種不同基因型菌株中常有1～2株仍可產(chǎn)酸，高齲組和無(wú)齲組中不同個(gè)體定植能產(chǎn)酸的菌株所占比例分別為85.14％和44.44％。從而證實(shí)高齲患者中分離的菌株的產(chǎn)酸能力強(qiáng)于無(wú)齲人群； 在不同的pH條件下，檢測(cè)變形鏈球菌的耐酸能力，結(jié)果表明，隨著pH值的降低，高齲組和無(wú)齲組中變形鏈球菌臨床分離株及UA159耐酸能力

5、均呈下降趨勢(shì)，當(dāng)pH值為7.0、6.5、6.0時(shí)，三組菌株的生長(zhǎng)良好，pH值為5.5、5.0時(shí)，三組菌株的生長(zhǎng)受到明顯抑制，但均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。當(dāng)pH值為4.5時(shí)，三組菌株的生長(zhǎng)也受到明顯抑制，但存在顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。pH值為4.0時(shí)，分離自無(wú)齲組的菌株普遍生長(zhǎng)太差，高齲組和無(wú)齲組中不同個(gè)體定植的能耐酸的菌株所占比例分別為55.40％和29.63％。表明高齲患者中分離的菌株的耐酸能力強(qiáng)于無(wú)齲人群。 實(shí)驗(yàn)三：老年人牙菌斑中變形鏈球菌

6、臨床分離株體外合成胞外多糖能力的研究。 用改良蒽酮法測(cè)定其合成胞外多糖的能力，并與國(guó)際參考菌株比較，分析其致齲水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：①老年人高齲患者牙菌斑中分離出的變形鏈球菌臨床分離株合成胞外多糖能力明顯高于無(wú)齲組(P＜0.05)，說(shuō)明合成胞外多糖的能力不同是導(dǎo)致菌株致齲性差異的原因之一；②三組中合成水不溶性胞外多糖的能力都大于合成水溶性胞外多糖的能力，表明水不溶性胞外多糖較水溶性胞外多糖與齲病的發(fā)生更為密切；③在老年人高齲患者同一個(gè)

7、體的牙菌斑中其變形鏈球菌的臨床分離株致齲能力存在差異，而在無(wú)齲者牙菌斑中分離的不同基因型變形鏈球菌合成胞外多糖的能力無(wú)明顯差異，提示合成胞外多糖能力不同的菌株同時(shí)定植可能具有某種臨床意義。總之，變形鏈球菌臨床分離株合成胞外多糖能力與老年人齲病的發(fā)生密切相關(guān)。 實(shí)驗(yàn)四：熒光標(biāo)記技術(shù)檢測(cè)老年人牙菌斑中變形鏈球菌臨床分離株體外黏附能力。 用熒光劑BCECF/AM標(biāo)記體外培養(yǎng)的變形鏈球菌臨床分離株，與唾液包被的羥基磷灰石共同孵育

8、后，在熒光分光光度計(jì)上測(cè)定其黏附的百分比，比較各分離株的黏附能力，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，高齲組：黏附能力在20％以下(包括20％)有15株、20％-25％有23株、25％以上(包括25％)有36株，其所占百分比分別為：20.27％、31.08％和48.65％；無(wú)齲組：黏附能力在20％以下(包括20％)有11株、20％～25％有13株、25％以上(包括25％)有3株，其所占百分比分別是：40.74％、48.15％和11.11％；參考菌株UA159的黏