沒食子鞣質(zhì)對變形鏈球菌致齲機(jī)制作用的研究.pdf

1、目的：沒食子鞣質(zhì)是從沒食子中提取出的主要活性成分，其對口腔細(xì)菌的作用機(jī)制尚不清楚，本課題研究沒食子鞣質(zhì)對浮游狀態(tài)和生物膜狀態(tài)下變形鏈球菌生長、產(chǎn)糖、產(chǎn)酸的抑制作用以及對主要致齲毒力因子乳酸脫氫酶(LDH)和葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶(GTF)活性及gtfB、gtfC、gtfD基因表達(dá)的影響，探討其防齲的作用機(jī)制，為開發(fā)天然維藥防齲制劑提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：⑴采用紙片擴(kuò)散法測定不同濃度沒食子鞣質(zhì)溶液對變形鏈球菌的抑菌圈大小，采用試

2、管稀釋法測定沒食子鞣質(zhì)對變形鏈球菌生長的最低抑菌濃度(MIC)、最低殺菌濃度(MBC)值大小，用半定量可見光測定OD值的方法生物膜最低抑菌濃度(MBEC)值；⑵分別采用酸度計(jì)測定pH值變化法和蒽酮法評價(jià)沒食子鞣質(zhì)對不同狀態(tài)變形鏈球菌產(chǎn)酸的作用及產(chǎn)胞外多糖的作用；⑶硫酸銨沉淀法提取葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶粗酶，考馬斯亮藍(lán)法和蒽酮法分別測定總蛋白和還原糖含量，檢測試驗(yàn)藥物對不同狀態(tài)變形鏈球菌葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶；通過還原性輔酶Ⅰ氧化法測定乳酸脫氫酶活性；⑷

3、運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測藥物對變形鏈球菌gtfs基因表達(dá)的差異。
　　 結(jié)果：①沒食子鞣質(zhì)對變形鏈球菌的生長具有明顯的抑制作用，經(jīng)液體稀釋法實(shí)驗(yàn)測定，沒食子對變形鏈球菌的MIC為4mg/ml，MBC為16mg/ml，經(jīng)半定量可見光測定OD值的方法測定沒食子鞣質(zhì)對變形鏈球菌單菌生物膜生長的MBEC值為8mg/ml；②沒食子對變形鏈球菌的產(chǎn)酸和胞外多糖WIG的合成具有抑制作用；③葡萄基轉(zhuǎn)移酶和乳酸脫氫酶活性在細(xì)菌不同培養(yǎng)狀態(tài)下有

4、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），浮游狀態(tài)下GTF酶活性高于生物膜狀態(tài)；沒食子、氟化鈉、沒食子聯(lián)合氟化鈉對細(xì)菌不同狀態(tài)下葡萄基轉(zhuǎn)移酶和乳酸脫氫酶活性的抑制率有差異（P＜0.05），葡萄基轉(zhuǎn)移酶抑制率沒食子＞沒食子聯(lián)合氟化鈉＞氟化鈉，乳酸脫氫酶抑制率沒食子鞣質(zhì)＞氟化鈉＞沒食子鞣質(zhì)聯(lián)合氟化鈉；④變形鏈球菌gtfs的表達(dá)不同程度地受到?jīng)]食子鞣質(zhì)的影響。
　　 結(jié)論：實(shí)驗(yàn)藥物對變形鏈球菌的毒力因子有明顯的抑制作用，對葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶活性的影響可