檸檬提取物對(duì)變形鏈球菌致齲相關(guān)酶活性及代謝產(chǎn)物的影響.pdf

1、目的:齲病是最常見(jiàn)的口腔感染性疾病之一,變形鏈球菌是公認(rèn)的主要致齲菌。天然產(chǎn)物的防齲作用及機(jī)制已成為國(guó)內(nèi)外防齲藥物研究的熱點(diǎn)。檸檬提取物是由水果檸檬中提取的一種淡黃色液體。前期實(shí)驗(yàn)表明檸檬提取物有抑制變形鏈球菌生長(zhǎng)、產(chǎn)酸和黏附的作用,本研究通過(guò)研究檸檬提取物對(duì)變形鏈球菌致齲相關(guān)酶的活性及代謝產(chǎn)物的抑制作用,進(jìn)一步探討檸檬提取物抑制變形鏈球菌的附著性、代謝產(chǎn)酸的作用機(jī)制,同時(shí)分析代謝酶在細(xì)菌致齲作用中的意義,為今后開(kāi)發(fā)天然、無(wú)毒副作用、新

2、型的防齲制劑提供依據(jù)。
　　 方法:
　　 1.檸檬提取物對(duì)變形鏈球菌葡糖基轉(zhuǎn)移酶活性和細(xì)胞外多糖含量的影響
　　 采用二倍稀釋法,用含2％蔗糖的胰蛋白酶消化大豆培養(yǎng)基(Trypticase SoyBroth TSB)將檸檬提取物稀釋為0.313μl/ml、0.156μl/ml、0.078μl/ml和0.039μl/ml4個(gè)濃度的溶液(最小抑菌濃度為0.625μl/ml),以TSB液體培養(yǎng)基作為空白對(duì)照組。加入變

3、形鏈球菌菌液,用Neson-Somogyi法測(cè)定培養(yǎng)6h、18h、24h和48h培養(yǎng)液中還原糖的含量,計(jì)算出酶活性；同時(shí)采用蒽酮法測(cè)定水不溶性多糖和水溶性多糖的含量,并對(duì)該酶活性和胞外多糖含量做相關(guān)性分析,以探討檸檬提取物抑制變形鏈球菌附著作用機(jī)制。
　　 2.檸檬提取物對(duì)變形鏈球菌蔗糖酶活性的影響
　　 分組設(shè)計(jì)同上。變形鏈球菌中蔗糖酶可以水解蔗糖,產(chǎn)物葡萄糖與3,5-二硝基水楊酸反應(yīng),生成橘紅色化合物,其顏色深淺與還

4、原糖量成正比。根據(jù)此原理測(cè)定變形鏈球菌培養(yǎng)6h、18h、24h和48h培養(yǎng)液中葡萄糖的含量,推算出蔗糖酶活性,以研究檸檬提取物對(duì)變形鏈球菌利用碳水化合物能力的影響。
　　 3.檸檬提取物對(duì)變形鏈球菌乳酸脫氫酶活性和產(chǎn)酸的影響
　　 分組設(shè)計(jì)同上。采用還原性輔酶Ⅰ氧化法,測(cè)定檸檬提取物對(duì)變形鏈球菌乳酸脫氫酶活性的影響,同時(shí)用pH計(jì)測(cè)定用藥前后培養(yǎng)液中pH值的變化(△pH),以檢測(cè)檸檬提取物對(duì)變形鏈球菌產(chǎn)酸能力的抑制作用,并

5、對(duì)該酶活性和細(xì)菌代謝產(chǎn)酸能力做相關(guān)性分析。
　　 結(jié)果:
　　 1.隨著檸檬提取物溶液濃度的升高,變形鏈球菌葡糖基轉(zhuǎn)移酶活性和細(xì)胞外多糖含量逐漸降低,在各個(gè)時(shí)間點(diǎn),除0.039μl/ml組和0.078μl/ml組間均數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)外,各實(shí)驗(yàn)組之間及實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組之間酶活性、水不溶性多糖含量和水溶性多糖含量差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；葡糖基轉(zhuǎn)移酶活性和水不溶性多糖含量之間呈正相關(guān)(r=0.8

6、25～0.963,P<0.01),葡糖基轉(zhuǎn)移酶活性和水溶性多糖含量之間亦呈正相關(guān)(r=0.814～0.950,P<0.01),且葡糖基轉(zhuǎn)移酶活性對(duì)兩者的相關(guān)性比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.37,P<0.01)。(濃度組-空白對(duì)照組)酶活性、WIG含量的總體均數(shù)在6h,18h,24h和48h間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=19.28 F=36.16,P<0.01),(濃度組-空白對(duì)照組)WSG含量的總體均數(shù)在18h與6h、24h、48h間比較有統(tǒng)計(jì)

7、學(xué)意義(F=5.15,P<0.01)。
　　 2.隨著檸檬提取物溶液濃度的升高,變形鏈球菌蔗糖酶活性逐漸降低,在各個(gè)時(shí)間點(diǎn),從0.078μl/ml組到0.313μl/ml組,各實(shí)驗(yàn)組均數(shù)間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),各實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組蔗糖酶活性比較亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。(濃度組-空白對(duì)照組)酶活性的總體均數(shù)在18h與6h、24h、48h比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=300.78,P<0.01)。
　　 3

8、.隨著檸檬提取物溶液濃度的升高,乳酸脫氫酶活性和ΔpH逐漸降低,在各個(gè)時(shí)間點(diǎn),從0.078μl/ml組到0.313μl/ml組,各實(shí)驗(yàn)組均數(shù)間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),各實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組酶活性、△pH均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；乳酸脫氫酶活性和△pH值之間呈正相關(guān)(r=0.8596～0.9460,P<0.01)。(濃度組-空白對(duì)照組)乳酸脫氫酶活性和△pH的總體均數(shù)在四個(gè)時(shí)間點(diǎn)間比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

9、　　 結(jié)論:
　　 1.檸檬提取物對(duì)變形鏈球菌葡糖基轉(zhuǎn)移酶和細(xì)胞外多糖的合成具有抑制作用,從0.078μl/ml起,隨著藥物濃度的升高,抑制作用增強(qiáng)。
　　 2.檸檬提取物可以抑制變形鏈球菌蔗糖酶活性,從0.078μl/ml起,隨著藥物濃度的升高,抑制作用增強(qiáng)。
　　 3.檸檬提取物可以抑制變形鏈球菌乳酸脫氫酶活性及影響糖代謝產(chǎn)酸能力,從0.078μl/ml起,隨著濃度的升高,抑制作用增強(qiáng)。
　　 4.