不同齲敏感兒童口腔變異鏈球菌臨床分離株不同基因型菌株有機酸及胞外多糖產(chǎn)生能力的實驗研究.pdf

1、目的：乳牙齲是兒童口腔中的常見病和多發(fā)病。變異鏈球菌DNA和毒力因子存在基因多態(tài)性，其致齲力的差異在一定程度上由其毒力因子的遺傳特性所決定。本研究在前期實驗的基礎(chǔ)上，對不同齲敏感兒童口腔變異鏈球菌臨床分離株不同基因型菌株有機酸及細胞外多糖產(chǎn)生能力是否存在差異進行探討，分析不同基因型菌株在致齲過程中是否發(fā)揮了不同的作用，探索通過檢測兒童口腔中變異鏈球菌的基因型來預(yù)測兒童齲敏感性的可能性，為完善齲危險性預(yù)測方法提供有力的理論和實驗依據(jù)。

2、 方法： 1．以前期實驗獲得的具有不同基因核型的高齲，齲失補指數(shù)（dmft）≥6、中齲，6>dmft≥4，無齲，dmft=0共111株變異鏈球菌中選取其中66株臨床分離菌株（包括23種基因型）為實驗菌株，于輕唾瓊脂（MS）平板復(fù)蘇，涂片檢查為純培養(yǎng)后，取典型菌落接種于牛心腦浸液（BHI）中，37℃厭氧（80%N2、10%H2、10%CO2）培養(yǎng)24h，配制相同濃度的菌懸液（A540nm=1．0），分別接種100μl于10ml

3、含1%（w/v）蔗糖的BHI液體培養(yǎng)基中，37℃厭氧培養(yǎng)32h后提取代謝有機酸產(chǎn)物，用氣相色譜儀對實驗樣本進行測定，比較不同基因型實驗菌株代謝產(chǎn)生的各有機酸量是否存在差異。 2．取相同濃度（A540nm=1．0）的各變異鏈球菌臨床分離株菌懸液，按菌液與含1%蔗糖的BHI液體培養(yǎng)基1：10（v/v）的比例接種細菌，37℃厭氧培養(yǎng)24h，離心，收集上清液，細菌沉淀物用5ml蒸餾水洗滌、離心兩次，三次上清液合并；水洗后的細菌加入0．5

4、mol/L NaOH5ml洗滌、離心三次，合并上清液。兩部分上清液各取2ml，分別加入三倍體積無水乙醇，4℃冰箱放置過夜，離心，棄水相，沉淀分別加入5ml蒸餾水及5ml0．1 mol/L NaOH溶液溶解，用蒽酮法分別測定水溶性及水不溶性葡聚糖含量。 結(jié)果： 1．高齲、中齲及無齲兒童攜帶不同基因型數(shù)目的變異鏈球菌臨床分離株有機酸代謝產(chǎn)物的產(chǎn)生能力存在差異，高齲組>中齲組>無齲組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。不同基因型菌株有機酸產(chǎn)

5、生能力也有差異，攜帶基因型數(shù)目越多的菌株其產(chǎn)酸能力越強。所產(chǎn)生的有機酸，乳酸的量明顯高于乙酸和甲酸。 2．高齲、中齲組變異鏈球菌臨床分離株合成水溶性葡聚糖和水不溶性葡聚糖能力無明顯不同，但均強于無齲組；不同基因型菌株合成水溶性葡聚糖和水不溶性葡聚糖能力無顯著性差異。所有菌株合成水溶性葡聚糖的能力均高于水不溶性葡聚糖。 結(jié)論： 1．攜帶不同基因型數(shù)目的變異鏈球菌臨床分離株有機酸代謝產(chǎn)物的量存在差異，基因型越多的菌株