豬鏈球菌的分離鑒定及2型豬鏈球菌基因芯片檢測(cè)技術(shù)的試驗(yàn)研究.pdf

1、豬鏈球菌病是由鏈球菌感染所引起的豬的一類(lèi)疾病的總稱。該病分布范圍極廣，世界各地均有發(fā)生。自20世紀(jì)50年代初期證實(shí)以來(lái)，荷蘭、英國(guó)、美國(guó)等世界許多國(guó)家先后報(bào)道了豬鏈球菌病。由于鏈球菌血清型眾多，抗原結(jié)構(gòu)復(fù)雜，該病嚴(yán)重影響各國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展，尤其是對(duì)高密度的養(yǎng)豬場(chǎng)危害更大，給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，受到越來(lái)越多的重視。近幾年，我國(guó)豬鏈球菌病的發(fā)生和危害日趨嚴(yán)重，除西藏等少數(shù)地區(qū)尚未發(fā)現(xiàn)該病外，大多數(shù)省、市、自治區(qū)均有不同程度的發(fā)生與流行

2、，并引起從業(yè)人員感染和死亡，嚴(yán)重威脅了人類(lèi)公共衛(wèi)生，因此建立一種新型、快速、準(zhǔn)確的豬鏈球菌檢測(cè)方法就尤為重要。
　　 基因芯片是生物技術(shù)與電子芯片融合的結(jié)晶，是由固定于固相載體表面的核苷酸陣列構(gòu)成的一種新型微器件，通過(guò)設(shè)計(jì)針對(duì)目的基因的探針，與被檢測(cè)基因的堿基序列互補(bǔ)匹配，可快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)到目的基因，用于動(dòng)物疫病的診斷。由于其快速、微量、準(zhǔn)確的應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)，正在成為新一代的自動(dòng)化疫病檢測(cè)工具。
　　 本研究采用微生物學(xué)、血

3、清學(xué)、PCR擴(kuò)增和序列測(cè)定相結(jié)合的方法，對(duì)病料中的豬鏈球菌進(jìn)行分型鑒定，為實(shí)施科學(xué)有效的豬鏈球菌防控措施提供依據(jù)。
　　 本研究通過(guò)2型標(biāo)準(zhǔn)菌株特異性探針制作基因芯片，將被檢樣品在PCR過(guò)程中用Cy3標(biāo)記，得到的DNA產(chǎn)物與芯片雜交，達(dá)到檢測(cè)2型鏈球菌的目的，建立2型豬鏈球菌基因芯片檢測(cè)方法；同時(shí)通過(guò)研究不同靶探針濃度利雜交時(shí)間等對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，確立最佳反應(yīng)條件為42℃水浴鍋中溫浴30min，探針濃度住5μM/L時(shí)即可得到較好

4、的雜交信號(hào)；本研究制備的豬鏈球菌2型基因芯片，可以成功地檢測(cè)到豬鏈球菌2型特異區(qū)基因，熒光信號(hào)清晰，敏感性高，實(shí)際應(yīng)用效果好，是一種檢出率高的診斷方法。該方法不僅為實(shí)現(xiàn)多種病原體在同一張芯片上進(jìn)行檢測(cè)奠定基礎(chǔ)，同時(shí)也為其他致病菌應(yīng)用基因芯片方法檢測(cè)提供了理論依據(jù)。
　　 總之，本研究將基因芯片技術(shù)應(yīng)用于動(dòng)物疫病的檢測(cè)，成功建立了2型豬鏈球菌基因芯片檢測(cè)技術(shù)平臺(tái)，解決了疫病檢測(cè)中的難題，具有重大的理論意義和應(yīng)用價(jià)值。為今后利用基因