豬鏈球菌防治新技術(shù)研究.pdf

1、本研究對(duì)16起疑似豬鏈球菌感染病料進(jìn)行分菌鑒定后,確認(rèn)14起為豬鏈球菌感染,其中2型3起,7型5起,6起是1、2、7和9型之外的血清型,一起弓形蟲感染,一起未查明病因。對(duì)甘、青、寧三省的豬鏈球菌2型的血清學(xué)調(diào)查結(jié)果表明,臨床健康豬群的豬鏈球菌2型抗體陽(yáng)性率為0～16.7％；連續(xù)5年從甘肅武威健康豬只采取扁桃體分菌,豬鏈球菌的分離率為27.2％,其中2型5.5％,9型13.2％,7型11.4％,1型3.7％,66％是1、2、7和9型之外的

2、血清型。藥敏檢測(cè)表明多重耐藥性菌株占分離菌株的84％以上。
　　 通過(guò)基因篩選、不相合性檢測(cè)及不同基因序列組合分型,發(fā)現(xiàn)由dnaK-EFTu-potA—eno-uvrA—guaB的基因合并序列所構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)生樹在各節(jié)點(diǎn)處的自舉檢驗(yàn)值均≥85％,該系統(tǒng)發(fā)育樹從根本上提高了鏈球菌分型結(jié)果的可靠性。據(jù)此,鏈球菌分為3群,第一群為mitis群鏈球菌、豬鏈球菌和熱鏈球菌,豬鏈球菌與mitis群鏈球菌的遺傳關(guān)系極為密切；第二群為pyogen

3、ic群鏈球菌；第三群為變異鏈球菌和牛鏈球菌。該系統(tǒng)發(fā)育樹從根本上提高了鏈球菌分型的準(zhǔn)確性。potA基因上一段堿基序列,能夠在種的水平上對(duì)各種鏈球菌分類。
　　 通過(guò)滅活豬鏈球菌2型強(qiáng)毒株基因組上的D-丙氨酸消旋酶基因,篩選到依賴外源D-丙氨酸才能復(fù)制的變異菌株24株。接著通過(guò)生長(zhǎng)試驗(yàn)篩選出5株生長(zhǎng)良好的變異菌株。為了選擇制苗菌株,將5個(gè)變異菌株分別接種于10只22-24g SPF昆明小鼠。4周后,根據(jù)小鼠不同組織器官中變異菌株的

4、存留情況以及免疫效力,篩選出一株制苗候選菌株,命名為S.suis serotype211△alr2／24。為測(cè)定該菌株實(shí)用免疫劑量,分別以5×108,1×109,2×109,3×109,4×109,5×109CFU劑量接種3-4周齡豬鏈球菌2型抗體陰性小豬5只,同時(shí)用5只小豬作為空白對(duì)照。免疫4周后,用1.7×107劑量的豬鏈球菌強(qiáng)毒株通過(guò)耳靜脈攻毒。結(jié)果對(duì)照組小豬在1周內(nèi)全部死亡(5／5),5×108組和1×109組歌存活3頭,2×1

5、09組以及3×109組各存活3頭,4×109和5×109組全部存活。從而確定4×109CFU為試制疫苗的實(shí)用劑量。用該劑量試制疫苗2批,在單次超劑量免疫仔豬的安全性試驗(yàn)和單劑量多次免疫仔豬的安全性試驗(yàn)中,從免疫仔豬的肝、心、脾、肺、腦和扁桃體均未檢測(cè)到1△alr2／24菌株存在,說(shuō)明該疫苗是安全可靠的。試制疫苗2批,按實(shí)用免疫劑量接種小豬各5只。4周后,用藥2.1×107劑量的豬鏈球菌強(qiáng)毒株通過(guò)耳靜脈攻毒,結(jié)果未免疫小豬全部死亡,免疫組