溫度響應(yīng)型基因載體的研究.pdf

1、基因治療作為治療疾病的一種手段已經(jīng)越來(lái)越多地引起人們的關(guān)注。在基因治療中，具有高選擇性和高轉(zhuǎn)染性的基因載體的使用是十分重要的。因此，開(kāi)發(fā)具有可控性和較高轉(zhuǎn)染效率的智能基因載體就成為當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。
　　 本文通過(guò)自由基聚合的方法合成了陽(yáng)離子接枝共聚物——聚(甲基丙烯酸N，N-二甲基氨基乙酯-co-(順丁烯二酸酐-聚(N-異丙基丙烯酰胺-co-甲基丙烯酸正丁酯)))(PDMNIB)，并且探討了PDMNIB與DNA分子間的相互作用以

2、及PDMNIB/DNA復(fù)合物體外的細(xì)胞轉(zhuǎn)染情況。PDMNIB是一種具有溫度響應(yīng)性的陽(yáng)離子接枝共聚物，通過(guò)紫外分光光度計(jì)測(cè)得了該聚合物的臨界溶液溫度(LCST)在20℃左右。瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)PDMNIB能夠很好的與DNA分子發(fā)生相互作用形成較為穩(wěn)定的復(fù)合物，并且發(fā)現(xiàn)制備該復(fù)合物的最佳溫度應(yīng)該在PDMNIB的LCST以下。Zeta電位實(shí)驗(yàn)和動(dòng)態(tài)光散射實(shí)驗(yàn)(DLS)進(jìn)一步對(duì)該復(fù)合物的溫度響應(yīng)性進(jìn)行了分析，并發(fā)現(xiàn)PDMNIB/DNA復(fù)合物

3、的表面電荷和粒徑大小能夠被外界溫度所調(diào)控，因而具有很好的溫度響應(yīng)性。通過(guò)利用在有血清和無(wú)血清條件下分別制備的PDMNIB/DNA復(fù)合物進(jìn)行體外的細(xì)胞轉(zhuǎn)染可以發(fā)現(xiàn)，由于溫度的改變能夠影響PDMNIB與DNA分子間的相互作用，因此，在適當(dāng)時(shí)刻對(duì)細(xì)胞進(jìn)行短暫的低溫培養(yǎng)可以明顯地提高細(xì)胞的基因轉(zhuǎn)染效率，同時(shí)實(shí)現(xiàn)了溫度可控的細(xì)胞轉(zhuǎn)染。通過(guò)對(duì)PDMNIB這種新型溫度響應(yīng)性基因載體的研究，豐富了基因載體的研究領(lǐng)域并且為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)具有高轉(zhuǎn)染性和可控性的